DNA聚合酶β在食管癌中的表达及其生物学效应的研究.pdf

郑州大学
博士学位论文
DNA聚合酶β在食管癌中的表达及其生物学效应的研究
姓名:郑乃刚
申请学位级别:博士
专业:病理与病理生理学
指导教师:董子明;吴景兰

英文缩写对照表塑型盔堂堡主堂垡堡兰茎皇塑三盟墨查瓸甤艨猚.—··瓹猵獁珹一猺.’産猯—猙猺籨
畉——.郑州大学博士学位论文英文缩写对照表‘
酆厦窧在食管癌中的表达及其生物学效应的研究摘要研究目的:肿瘤发生是一个有遗传和环境因素共同参与的多基因多步因及抑癌基因等的突变积累和恶性变细胞克隆的选择性扩增。实验表明一个增变基因的突变可导致细胞突变率的显著增高,早于癌基因及抑癌基因等的突变,其在癌变中的作用越来越受到重视。碱基切除修复是维护基因组稳定的重要机制之一,主要负责人体细胞经常发生的内源性的大量切除修复。而聚合酶§是碱基切除修复机制的关键分子。正常细胞酆厦堑退奖泶锏摹S斜ǖ蓝嗍琢鲎橹蛳赴担括胶质瘤、淋巴瘤、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌和肝癌的基敏感性降低而耐受性增高,可导致基因组不稳定性、跨损伤修复和增变研究生郑州大学医学院病理生理学教研室骤的发展过程,可分为启动、发展和演进三个阶段,涉及增变基因、癌基∷鹕耍缪趸募罨⑼榛募罨偷チ碊断裂等单个核苷酸的聚合酶皆是高表达的。高表达的酆厦窧修复保真性差,对错配碱基因表型增加。在小鼠细胞系内突变的酆厦谋泶锟擅飨董子明导师吴景兰中国郑州郑乃刚郑州大学博士学位论文
研究方法:橹瓯局票讣白躌的提取:例未经治疗食管癌抑制野生型酆厦窧的功能使细胞突变频率成倍增加。本课题组曾对人食管癌的酆厦窧基因的突变情况进行的研究显示癌旁组织突变聚合酶泶锼绞欠窨赡芟蛘5退降鹘同时斜匦璨斡氲的表达质粒转染于细胞而使细胞的生发展的关系具有重要意义,国内外尚未见报道。本文应用原位杂交、免疫组织化学、H镜确肿由镅Ъ际醵匀耸彻馨┳橹┡宰橹罢进行了探讨。患者的手术标本包括癌灶、癌旁及相邻正常的共块组织,等分为荩葑橹%多聚甲醛固定制备石蜡包埋切片;试剂提取总鯮斑点印迹。⒎只盏技链谋泶镏柿一稳定转染扩增、双酶切和电泳分离及提纯检出率/兜陀诎┳橹/5耸彻馨┳橹┡约罢W织的酆厦基因表达情况如何耸彻馨〦一赴档腄聚合酶欠窀弑泶当应用分化诱导剂诱导赴只盌芮邢喙氐哪鸵┬匀绾如将含野生型酆厦窧基因泶锝步提高,是否会导致细胞进一步恶性化故峭üδ艿髡窍赴氏忠定恶性逆转化庑┪侍舛匝芯緿聚合酶胧彻馨┠酥劣胫琢龅姆常粘膜的酆厦窧进行了相对定量及定位研究,并对分化诱导剂及野虳聚合酶谋泶镏柿WH径匀耸彻馨〦~>τ盟婊锓ㄖ票干锼和郑州大学博士学位论文摘要
研究结果:外转录法将ッ盖形O咝湍0澹覵狪刑逋庾B贾票阜匆錜探针;并以叩阌〖<觳各标记探针的灵敏度。ㄎ还鄄旌捅泶镄藕畔喽远浚河途迪鹿鄄熳橹值相对定量。同时以不加标记探针和不加特异性抗体的标本分别作为原位杂交和免疫组化的阴性对照。τ肈酸变性一甲绿一派郎宁染色计数增殖细胞比率。臣蒲Т碛τ胻检验、检验和相关分析等。相临正常组织内弱信号位于复鳞上皮的基层细胞,癌旁组织信号增强,癌灶组织内弱信号见于分化较高的癌巢,浸润的癌细胞信号较强,异型性巨高,。结果表明人食管癌中蚪细咚降谋泶锾崾究赡芪0┍。在癌灶组织、癌旁组织和正常组织中和谋泶锼及定位与虮泶锼郊岸ㄎ幌嗨疲浔泶锼揭菜孀畔赴裥猿度增加而增强。两者在癌组织内的表达水平呈显著正相关=峁砻魅耸彻馨┲蠵蚗的表达是高水平的。癌旁组织中参与缙谒鹕薙修复的和慕细咚降谋泶锟及地高辛标记的虰—及猰腸秸搿Sτ锰聚合酶、/细胞的各原位杂交信号或免疫反应性狪及狪的定位及其强弱级别。细胞信号/积分值结合叩阌〖5腡扫描数耸彻馨┳橹衟虮泶镄藕哦ㄎ挥谙赴剩癌细胞信号更强。虮泶锼孀畔赴裥猿潭仍黾佣銮俊0┰虮泶锼礁哂诎┡裕琾.:两者比正常组织表达显著增蚴歉弑泶锏摹0┡宰织郑州大学博二宦畚摘要
研究结论:研究结果提示关键词:┪锬褪苄约醯停琾.。┪锬褪苄栽效。榷ㄗH緋转染的赴对比时,表达上调和基因表达下调,馓崾綞组细胞呈现一定恶性可能通过表达的功能改变可能早于序列的突变;应用分化诱导剂诱导或将水平只盏技劣盏己和表达高水平钥赡芡ü鼴中必需的基因的表达上调而参与癌细胞的分化,并不完全依赖于基因表达细胞分化食管癌进一步提示为癌变的早期事件。τ梅只盏技劣盏糆一赴向正常水平分化时,细胞的蚴歉弑泶锏摹7粗巢淼腅一高,。这提示分化诱导剂比基因毒性药物可能具有较好的远期疗腅一赴与空载体稳定基因表达上调,6位于胞核的—颗粒明显增强组的表达增加,泶锵陆祊.;