hsp90基因的信号传导以及调控机制的研究.pdf

中国协和医学大学基础学院
博士学位论文
hsp90基因的信号传导以及调控机制的研究
姓名:李晓燕
申请学位级别:博士
专业:分子生物学及生物化学
指导教师:吴宁华

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≧琑蚦,它们不仅参与出生长因子和多肽激素介导的肌动蛋白骨架形成,而且在调控细胞生长,增殖以及应激等方面也发挥重要作用。在细胞受到紫外线照射,升温,高渗透压等多种应激时,藕磐繁患せ睿榈枷赴蛲黾安斡胂喙鼗虻谋泶调控过程。热与其他一些环境刺激可以诱导细胞中一系列应激相关蛋白,以应付外界刺激的压力,其中最重要的蛋白之一是蛋白作用于许多靶蛋白,使细胞内环境保持稳定。除热激外,许多诱导细胞凋亡的刺激也可诱导达增加,如紫外线或某些抗癌药物,能帮助变性蛋白重新复性或介导不可逆变性蛋白质的降解,保护细胞免于凋亡,使细胞度过应激期,存活下来。白是一种重要的分子伴侣,它广泛参与细胞的激素信号通路,细胞周期调控以及细胞发育等重要的生理过程。因而研究蛉扔盏急泶锏男藕磐范陨钊认识肿釉谌刃菘俗刺碌墓δ苡兄匾R庖濉哺乳动物至街郑碒虷欠直鹩蒆Ⅸ和基因编码,这两种基因的转录调控机制有很大不同。我们的第一部分研究主要探讨甅狫通路是否参与虻娜扔盏急泶锏骺兀⒁匾煨砸种萍羐鄄霩对热激活化的狹狫通路是否有调节作用。瓺猂,—和的表达抑制￡的启动子活性为了研究狹狫通路对泶锏骺刈饔茫颐抢孟孕愿和变,腞,和泶镏柿7直鹩際共转染,两种细胞,结果显示,在上述两种细胞中,—瓺狹珼唬甀的表达均能明显抑制ǜ婊虻娜扔盏蓟钚浴提示琈蚃等信号分子参与了热应激对基因的转录调控过程。中困叶和医科夫学博畕可凼
结果显示,,,—和的表达抑制钠舳踊钚为了研究—范詇虮泶锏骺氐淖髟翵,我们利用显性负突变的琈蚃表达质粒分别与共转染和细胞,结果显示,在上述两种细胞中,—珼狹,—谋泶锞能明显抑制报告基因的热诱导活性。提示琈蚃等信号分子参与了热应激对基因的转录调控过程。瓺猂、狫抑制热诱导细胞中转录因子狫磷酸化和表达用印迹法分析在分别转染了空载体、.狹甁的细胞和细胞中,热激处理后姿峄潭燃癱表达的变化。结果发现在这两种细胞中,.甅均能明显抑制热诱导的狫磷酸化和表达增加。提示—藕磐返牟斡肓巳诱导细胞中甁的磷酸化活化和表达过程。瓾特异抑制剂对热诱导的狫磷酸化的影响能够抑制热诱导的和细胞中牧姿峄ú煌ǘ鹊腉詂—鞍椎谋泶锩挥影响。体外激酶活性分析法研究发现,在细胞中,热激处理擅显诱导っ富钚裕琹预处理后的细胞再进行热激,钚韵灾下降,而对细胞中鞍妆泶锩挥杏跋臁R陨辖峁砻鳎珿ü抑制っ傅幕钚杂跋靋的磷酸化,提示斡肴扔盏嫉腏信号通路,但其作用的靶蛋白不是蚦—二.。是一类与细胞增殖有关的转录因子,包括琍,,甊和等至少五种蛋自。在未接受刺激的细胞中与其相应的抑制因子,甂,,甂昊騊,那疤錚琍结合,以非活性形式存在于细胞质中。
波酯,氧化刺激等通过激活甂纳嫌渭っ窱↖辏琜,使在蚐位发生磷酸化,进而泛素化并被蛋白酶体降解。降解后,—迁移入核,诱导含有结合位点的基因转录。.在促进细胞增殖的功能上与鞍紫嗨啤T诙嘀种琢鱿赴幸发现有—的组成性活化并与细胞的恶性增殖有关。而本组前期研究曾发现热休克刺激诱导细胞发生周期阻滞的现象。为此我们探讨了热刺激以及分子对肿瘤细胞—活化通路的影响。嫒燃ざ訨赴蚅赴四贜甶水平的影响〖=峁允荆谖从盏甲刺翵蚅赴四诙寄芗测到.,。,〖=峁允荆篔赴蚅赴直鹑刃菘舜鞳.,,后,与。哉兆橄啾龋琁蛋白表达增高,随热休克时间延长增加更明显。。热激对细胞和细胞中姿峄挠跋在未经热诱导的和细胞中,。。燃ざ訨赴蚅赴蠭活性的影响体外激酶活性分析显示:在未受热激处理的和细胞中,激酶薪细叩募っ富钚裕却擅飨砸种屏街窒赴械腎活性。提示热激可能通过抑制募っ富钚砸砸种芅猭幕罨中固叭簂医科人学衅芯可唬篬论文
瓽訨赴蠭磷酸化的影口基因编码。基因的表达比基因更易受热诱导的影响,因而对调控机制。另外,还对热激条件下蚐的活化以及泶锒的磷酸化状态,结果表明,蚐在热激以前其酪氨酸有一定程度的能够抑制非热激和热激处理的细胞中。。。广泛参与细胞的增殖,分化,周期调控及凋亡