遗传果蝇唾腺染色.doc

实验名称:果蝇唾腺染色体制片及观察一、目的掌握剖离果蝇幼虫唾腺的技术和制作唾液腺染色体标本的方法。观察果蝇唾腺染色体的形态特征了解体细胞染色体联会现象,并根据唾腺染色体上横纹的形态和排列,识别不同的染色体。,由DNA、RNA和蛋白质构成的,其形态和数目具有种系的特性。在细胞间期核中,以染色质丝形式存在。在细胞分裂时,染色质丝经过螺旋化、折叠、包装成为染色体,为显微镜下可见的具不同形状的小体。将正在分裂的细胞用碱性染料染色,你会发现细胞核中有许多染成深色的物质,这些物质叫做染色体(英语:Chromosome)。染色体由蛋白质、DNA和少量RNA组成。在生物的细胞核中,有一种易被碱性染料染上颜色的物质,叫做染色质。染色体只是染色质的另外一种形态。它们的组成成分是一样的,但是由于构型不一样,所以还是有一定的差别。染色体在细胞的有丝分裂间期由染色质螺旋化形成。用于化学分析的原核细胞的染色质含裸露的DNA,也就是不与其他类分子相连。而真核细胞染色体却复杂得多,由四类分子组成:即DNA,RNA,组蛋白(富有赖氨酸和精氨酸的低分子量碱性蛋白,至少有五种不同类型)和非组蛋白(酸性)。DNA和组蛋白的比例接近于1:1。本世纪初,——唾腺染色体(salivaryglangchomosomes)。由于它具有许多重要特点而成为细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学和分子遗传学研究中不可多得的好材料。果蝇是双翅目昆虫,幼虫期具有很大的唾腺细胞。果蝇唾液腺染色体是永久性间期染色体,由于间期染色体不螺旋化,而且不断地进行复制,细胞并不进行分裂,这样就使唾液腺染色体变成了巨大的染色体。果蝇唾腺染色体具有许多重要特征,为遗传学研究的许多方面,如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。:这种染色体比普通染色体大得多,宽约5um,长约400um,相当于普通染色体的100—150倍,因而又称巨大染色体。:果蝇的唾腺细胞停止在分裂间期,染色体核蛋白纤维不断复制,平行排列形成巨大而伸展的多线染色体,唾腺染色体经过多次复制而并不分开,每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝,所以又称多线染色体。:类似有丝分裂中的同源染色体联会,由于同源染色体紧密配对几乎相互融合,使果蝇的唾腺染色体只有二倍体数目的单元数。由于其体细胞同源染色体的配对,故易于进行染色体的缺失、重复、倒位和易位的细胞学观察和研究。:每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一,出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹,不同染色体的横纹数量、形状和排列顺序是恒定的。(泡)结构:幼虫的不同发育期,浓缩的染色纤维会成群解旋、松开,形成泡状松散结构,使相应的基因得以表达,这种泡状结构称Puff结构,又称染色体的松散。果蝇种间或种内不同品系与近缘种之间的遗传差异常表现为唾腺染色体不联会,形成泡(Puff)、溢痕(constrictions)、间带区(interband)的伸缩性以及顶体(telomere)的形态等多方面的变异,可观察是否产生了倒位、染色体的断裂、融合或重排,据此研究其基因序列的差异。果蝇唾腺染色体已广泛用于种内系统发育和种间亲缘关系的研究中。普通果蝇(2n=8)唾腺染色体的形态:各染色体着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的染色中心,第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈V形,各有两臂,X染色体呈棒状,第Ⅳ对染色体呈粒状,观察时可见五条臂由染色中心向外蜿蜒伸展。、仪器和试剂材料:黑腹果蝇的三龄幼虫。这种材料既易饲养,又易取得唾腺,但为了得到更好的染色体标本,需要在20—25度和营养良好的条件下饲养幼虫。选择性动迟缓、肥大,爬上管壁的三龄幼虫(就要化蛹了)做标本最佳。仪器:双筒解剖镜,显微镜,镊子,解剖针,载玻片,盖玻片,滤纸,绘图纸,酒精灯。试剂:,但染色效果不是很理想,而用碱性品红染液染色取得比较好的效果,染色时间约5分钟即可。在染色深度、清晰度、染色体的形态、背景层次都优于醋酸洋红,且一次配制可长期使用,所以不管是从染色时间还是作用效果,都优选碱性品红。原液A:3克碱性品红溶于100ml70%酒精中(此液可长期保存)原液B:取原液A10ml,加入90ml5%的苯酚水溶液,充分混匀后置于37℃温箱中2—4小时(此液只可保存2周)原液C:取原液B55ml,加入甲醛、冰醋酸各6ml充分混匀(此液可长期保存)配制染液时,取原液C10-20ml,加入80-90ml45%冰醋酸和1g山梨醇。b..Ephr