PTEN基因在脑胶质瘤表达的研究.pdf

青岛大学
硕士学位论文
PTEN基因在脑胶质瘤表达的研究
姓名:尹卫宁
申请学位级别:硕士
专业:神经外科学
指导教师:孟庆海

基因在脑胶质瘤表达的研究中文摘要青岛大学医学院神经外科学专业导师:孟庆海丶蔧基因逆转录聚合酶链反应研究生:尹卫宁脑胶质瘤基因表达本研究通过脑胶质瘤中基因的表达情况,进一步明确胶质瘤的发病机制及临床病理意义。揭示胶质瘤基因功能失活不仅局限于剑箍煞⑸谧B妓平。另外结合临床病理情况进行分析,揭示外显子失表达情况与标木的病理分级之间方法应用逆转录聚合酶链反应方法,检测例胶质瘤组织与例表达情况。结果在例肿瘤组织中,,.卜,显差异.,脑胶质瘤组织中不同基因片段之间失表达率无明显结论在脑胶质瘤发病过程中,并不完全由肿油槐渌穑琍虮泶产物的异常也可能与基因突变无关,而是由表达水平的异常所导致,进而导致蛋白功进展过程中转录水平的异常起重要作用。目的作为一种抑癌基因在胶质细胞瘤发生过程中起着重要作用,现在,许多研究都着眼于基因的突变。但是,基因突变并不能完全解释胶质细胞瘤的发病机制。的关系。正常脑组织基因外显子卜⒉、、表达水平与患者年龄、性别无关,。本研究发现失表达多发生在临床中晚期病人,说明在脑胶质瘤的..。正常脑组织中无一例失表达。脑胶质瘤中差别.’
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萱童——前言肿瘤的发生、发展以及转移与基因的异常有着密切的关系,并由此认为肿瘤是基因的疾病。胂瘤的特征性表现形式为不受控制的细胞增殖,并缺乏起源组织的生化特的恶性转化。肿瘤的细胞内基因变化大致可分为二类:G榭鱿乱种葡赴至训基因职┗的功能丧失。俳赴至鸦蛲吮涞幕癌基因δ茉銮俊适当表达。这些恶性表型包括:细胞过度分裂,侵袭邻近组织,耐受抗癌药物治疗及具有转移能力等。抑癌基因在正常情况下可抑制细胞的过度生长,抑带赴蚨裥员型转化。若缺乏有功能的抑癌基因编码蛋白,常会使细胞失去正常的生长抑制调控机制,转为恶性增殖状态。和辅助蛋自高度同源的磷酸酶。该基因是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种人类恶性肿瘤中均有不同程度的变异失活。研究表明,在胶质母细胞瘤中畛<幕蚋谋涫湃旧濉扔τ肦狿—方法检测多种肿瘤细胞系和移植瘤中基因的突变率,发现多形性胶质母细胞瘤为,这些研究表明在多形性胶质母细胞瘤中存在基因的突变,其中的一些突变将导致转录和蛋白水平的异常。然而基因表达产物的异常也可能与基因突变无关,“等在前列腺癌的研究中发现例肿瘤中没有发现突变,只有⑾执亢闲远JВ其余⑾钟蠵騧偷鞍椎娜笔Ъ暗退奖泶铮馑得髁嘶虮泶锊的晃常并非完全由基因突变所致,基因的转录过程中出现异常也有可能是其中的重要环节。本课题旨在从基因的转录水平揭示胶质细胞瘤的发生、发展机理。征,‘是一个与张力蛋白
材料与方法牧例胶质细胞瘤组织与例正常脑组织为..嗟捍笱б窖г荷窬—岁骄岁0碬褐柿龇旨侗曜糏级琁琁级例,①所有病例均有影像学诊断为依据╟按殴舱。②肿瘤组织均有术后病理诊断为依据。③肿瘤患者术前未经放、化疗及激素治疗。④组织学分级按旨肿瘤组织离体后即刻无菌取材,从肿瘤生长活跃、无坏死的边缘部位取下约大小的组织,立即放入处理的管中,置入一冰箱保存备用。正常组织同法取材。从μ逑怠⑽轗酶水、琼脂糖公司离心沉淀仪虾R接梅治鲆瞧鞒外科切除的标本琢觥⒛酝馍嘶颊。例标本中,男性例,女性例。年龄级例。.±≡。电子天平虾L炱揭瞧鞒
椒于大管中剪碎∮趌,倒入适量不可接触管,以防污染可调式微量移液器ü、贰⒀劭萍舻丁⒋罄胄墓芩⒏删缓笠訢荩缓笠运蒸水冲洗,高压消毒置电烤箱中烤干。将试剂、氯仿及%..渲艸液红用电子天平称取上述物质,加双蒸水。高温消毒。.橹逑剪碎组织并撼逑矗谖蘧夷诘憔凭ǖ啤4魑蘧痔住⒖谡帧=橹用塑料吸管吹打混均。用吸管将管中混合液一同转移大离心管内,、分钟离心。结束后弃上清,涸俅未荡蚶胄模崾笸椒ㄔ倮胄摹ù,将上清倒掉,于每个大管加试剂盟芰衔艽打混均后,用该吸管将及其组织一起转移到新的大管内,均浆在室温分钟光裂解核蛋白复合物,然后每毫升试剂加入氯仿涡旋秒,室温静