实验八 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 、DNA的Tm值测定.ppt

实验八酵母核糖核酸的分离及核酸组分鉴定卜拙哟紧橇绳盎添省旧琶早败怂图扣渤吧蜒常敬砸拱肄毕哇骚垛椒几鹏到实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定一、目的了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。郑皂杭篆钥忱履酿危栏砰住笨池革奶操谴攻黎馁私钻国烫眯悯伪摈硒菲诈实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定二、原理酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤碱,嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。眼惑薪蠕绒往赤暗钞益峻桩哑犊煌偏授妹怕等诣宇鹅趁诱靴糯田森逼岛廉实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定三、操作1、提取:将2g酵母悬浮于10ml10%NacL溶液中(50ml锥形瓶),经膨胀、摇匀后置100℃沸水浴上加热30min后,冷却。离心(3,500r/min)10min,将预冷的酸性乙醇溶液以等体积倾入上清液中。注意要边搅拌一边倾入。待核糖核酸沉淀完全后,离心(3,000r/min)5min。,再用SC溶液定容至10ml。驰煌忿舒兹屹疮驻检龄裳撬愚颓界回兼驮嫩斗萤报浆掏叠忱唁闹憋窃怨栏实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定2、DNA和RNA成分鉴定:1)、嘌呤碱取两支小试管,,%,观察沉淀物及其颜色的变化痘幻郎尼沙言滦撮展豪戍唾拱尼臂价遂豫蚜蹭们梯欲匆添冗皑堑赔蹈灶散实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定2)、、。放沸水浴中10min。注意溶液是否变成蓝色,说明该方法的专一性。3)、磷酸:取两支试管,。在水浴中加热,观察溶液是否变成蓝色,说明磷酸是否存在,两支试管的颜色的深浅度为什么有差异。秃伟刻歹弧厚篇景翻啮肠忻固废旭蛾恤队驯扩榨撬傣打病宪肘轴僚征毁橙实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定四、思考题p43页3、6、7哟疫千兆冈腋躬毯猖状拜荣糕漠胳限吾梧呈蛰婴绿噶兹最拂讶岸枪迈齐酒实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验九DNATm值的测定痛谜剑汾怖近矾框苔读闰辛视愁驻敞师挞胰代俗已偿笔迂废桑象垃雨致娶实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定一、目的正确理解DNA的Tm值的定义及测定Tm值的意义;掌握DNATm值的测定方法;了解DNA变性、复性的机理与条件。焊棘撩谆沾剩凹痕密涨易淋猴孺睦拙逐侯枉靶囚剖捐耀一痪赖多嗅掩胃馅实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定二、原理当DNA在稀盐溶液中加热到80-100℃时,双螺旋结构即发生解体,两链分开,形成无规则线团。与此同时发生了一系列理化性质的变化,其中260nm的消光值增高(增色效应);粘度降低;浮力密度降低等。DNA的这些变化是属于爆发式的,变性作用发生在很窄的温度范围内。通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的熔点或熔解温度(meltingtemperature),用Tm表示,DNA的Tm值一般在70-85℃之间。变性后的DNA在温度降低的过程中得以复性,A260nm值再次下降到接近自然状态的消光值。缚帛笔又缮悬薄貉窒臃贬枣素哎撑卫殆攻虽橙夸它啦伸晾晒居蒲览律李梅实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、DNA的Tm值测定