原代培养小鼠胚胎腭突间充质细胞的纯化方法研究.doc

原代培养小鼠胚胎腭突间充质细胞的纯化方法研究.doc原代培养小鼠胚胎腭突间充质细胞的纯化方法研究【关键词】胚胎[摘要]目的:建立纯化原代培养的小鼠胚胎腭突间充质细胞的纯化方法。方法:应用Dispase酶4°C消化处理离体小鼠胚胎腭突18h,通过振荡法使上皮和间充质分离,吸去上皮片。结果:应用流式细胞仪检测,胚胎腭突间充质细胞内几乎不含上皮细胞。结论:本方法为体外研究提供了理想的模型。[关键词]胚胎腭间充质细胞细胞培养纯化PurificationofCulturedC57BL/6JMouseEmbryonicPaiataimesenchymalCellsinVitro・XIAOWen-lin,SHIBing,LISheng,,SichuanUniversity,Chengdu610041[Abstract]Objective:Toestablishaneffectivepurificationmethodforprimarycultureofmouseembryonicpalatalmesenchymal(EPM)cells・Methods:ThedissectedembryonicpalatalshelveswereincubatedwithDispaseat4°Cfor18hours,anrudimentswereagitated,asmall-:TheEPMcellscontainedhardlyepithelialcellsbyflowcytometryanalysis・Conclusion:ThismethodsystemprovidesavaluablemodelforstudiesofEPMcellsinvitro.[Keywords]EmbryoPalatalmesenchymalcellCellculturePurification体外培养的细胞源于动物机体,因而从体内取得的培养材料所做的原代培养,绝大多数呈细胞混合生长。由胚胎腭突培养的间充质细胞(embryonicpalataimesenchymalcells,EPMcells)也不例外,体外培养的EPM细胞主要混有上皮细胞。利用体外培养细胞进行实验研究都要求采用单一种类细胞进行相对某一种类细胞的功能、形态等变化进行研究。因而培养细胞的纯化就成为培养细胞实验研究的重要一步。本文针对原代培养的C57BL/6J胎鼠的EPM细胞进行了纯化,达到了良好的效果。,8〜10周龄。由四川大学实验动物中心提供。(1:1)细胞培养基、胰蛋口酶、15mL离心管(Gibco,美国);EDTA>DispaseII酶(Sigma,美国);抗波形蛋白单抗(Vimentin)(Zymed,美国);胎牛Jtl清(Hyclone,美国);EPICSELITEESP型细胞仪(C0ULITER,美国)。,75%酒精浸泡1min,无菌条件下取出胚胎。参照YANO[1]的方法,并加以改进,在体视显微镜下应用显微外科器械剪取腭突。离体腭突在