高效液相色谱知识.pptx

1第二十章高效液相色谱法 highperformanceliquidchromatography;HPLC分析化学教研室李发美教授2经典液相色谱法为基础,引入气相色谱法的理论和实验技术,高压输送流动相,高效固定相及高灵敏度检测器,现代液相色谱分析方法。3与经典液相色谱法相比颗粒极细(一般为10m以下)、规则均匀的固定相,(键合相)传质阻抗小,柱效高,分离效率高;高压输液泵输送流动相,流速快,分析速度快;高灵敏度检测器,灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达109g,而荧光检测器最小检测限可达1012g。4与气相色谱法相比不受试样的挥发性和热稳定性的限制,应用范围广;可选用各种溶剂作为流动相,对分离的选择性有很大作用,选择性高;一般在室温条件下进行分离,不需要高柱温。5第一节高效液相色谱法的主要类型和原理一、主要类型 四类基本类型色谱法分配色谱法(partitionchromatography)吸附色谱法(adsorptionchromatography)离子交换色谱法(IEC)空间排阻色谱法(SEC)6第一节高效液相色谱法的主要类型和原理一、主要类型 四类基本类型色谱法分配色谱法(partitionchromatography)吸附色谱法(adsorptionchromatography)离子交换色谱法(IEC)空间排阻色谱法(SEC)化学键合相色谱法7其他色谱类型亲合色谱法(affinitychromatography;AC)手性色谱法()胶束色谱法(micellarchromatography;MC)电色谱法(electrochromatography;EC)8二、化学键合相色谱法以化学键合相为固定相的色谱法,简称键合相色谱法(bondedphasechromatography;BPC)化学键合相:采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相9优点:固定相的均一性和稳定性好,在使用过程中不易流失,使用周期长;柱效高;重现性好;能使用的流动相和键合相的种类多,分离的选择性高正相(normalphase,NP)和反相(reversedphase,RP)键合相色谱法:根据化学键合相与流动相极性的相对强弱10(一)正相键合相色谱法固定相:极性键合相如氰基(-CN)、氨基(-NH2)或二羟基键合硅胶。(经典:水饱和的硅胶)流动相:非极性或弱极性溶剂加极性调整剂如烷烃加醇类。(与水不混溶的溶剂)适用范围:溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物如一些在硅胶柱上分离的物质