目的基因的制备基因文库法.ppt

目的基因的制备基因文库法1目的基因的获取/(genomiclibrary)3分离基因组DNADNA片段与载体连接导入细胞筛选限制性内切酶基因组DNA基因重组转化细菌体外包装4以l噬菌体制作基因组文库,在一个基因组文库面,所有可能的基因皆被大量复制。利用探针筛选特定基因。,,利用低等生物如细菌、病毒、噬菌体等生长快、繁殖能力强的特点作为一种核酸扩增的载体,把人类等高等生物的基因或其片段重组其中,成为便于保存、取用方便的基因库。建立基因库的目的是为了便于目的基因的保存、扩增和纯化。7基因组文库的质量评价和完备性基因组文库必须包括一定数量的重组子才可能克隆基因组中的任何序列。基因组文库完备性是指从基因组文库中筛选出含有某一目的基因的重组克隆的概率。如果满足两个条件:生物体染色体DNA片段被全部克隆,用于构建基因文库的DNA片段含有完整的基因,则此基因文库的完备性就是1。用基因组文库的克隆数表示基因组文库的大小即库容量。(N)=基因组DNA总长DNA插入片段的平均长度某种生物基因组DNA总长度为3×106kb,酶切后的DNA片段平均长度为15kb,则基因组文库的克隆数应为3×106kb/15kb=2×105个克隆。在实际工作中,由于在基因组文库的构建过程中存在多步操作,一个具备完好代表性的基因组文库的库容量大大超过这个理论值。(1-f/g)N=ln(1-P)P为从文库中选出任一基因或DNA序列的概率即完备性,一般设为99%();f为载体容量(kb);g为基因组大小(kb);N为基因组文库的克隆总数,表示文库中以P概率出现某段DNA,理论上应具有的最少克隆数;10