DNA提取方法总结.doc

对一些DNA提取方法的总结细菌DNA的提取:(一)试剂:%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl()25mMEDTA()-water(抑制RNA酶活性)()%%乙醇步骤:℃预热;(700ul)中混匀,65℃,10min;(25:24:1),振荡,离心12,000rpm,10min;,加氯仿/异戊醇(24:1)振荡,离心12,000rpm,10min;,重复4步骤;(或加入等体积的异丙醇),-20C沉淀;,000rpm,10min;,70%乙醇洗,也可以再用100%乙醇洗,然后溶解于100ml水中。(二)(我们常用的方法,但是有时有些细菌特别不好提,就用上面的方法),37℃震荡培养过夜。。,反复吹打使之重新悬浮,加入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K,混匀,于37℃,充分混匀,再加入80ulCTAB/NaCl溶液,混匀后再65℃温育10min。,离心4-5min,将上清转入一只新管中,-,轻轻混合直到DNA沉淀下来,沉淀可稍加离心。%乙醇洗涤后,:(一),,:异戊醇(24:1),涡旋3~5min(此处是粗提没有加酚,可以节约成本的哟!),4℃,:异戊醇(24:1)再抽提一次(10,000rpm,4℃离心5min),加入2/3倍体积的-20℃,混匀,静置约30minulTE中?,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,(10mg/mL),37℃():氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min),1/10V3MNaAc,,-70℃%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用DNA提取液:-HCl(),,,1%SDS,3MNaAc(二)-1g,℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min),加入2/3倍体积的-20℃预冷异