试析对苯二酚和牛血清白蛋白相互功效探究.doc

试析对苯二酚和牛血清白蛋白相互功效探究【摘要】目的探索对苯二酚和血清白蛋白的相互功效。方法在005mol/LNa2HPO4-005mol/LNaH2PO4-010mol/LNaCl缓冲溶液中(pH=730),查看对苯二酚及牛血清白蛋白和对苯二酚结合后在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为。结果牛血清白蛋白和对苯二酚结合后可使对苯二酚的氧化峰峰电位正移,还原峰电位负移,且使苯二醌还原峰电流减小,根据对苯二酚、对苯二醌和血清白蛋白结合的饱和度,计算苯二酚、对苯二醌和血清白蛋白结合比分别为48:1和16:1。结论牛血清白蛋白和对苯二酚结合以较强的氢键结合,对苯二醌和血清白蛋白结合力较大。【关键词】对苯二酚蛋白质是生物体的基本组成成分,如酶、抗体、转运蛋白等在生物体内发挥着重要功效。人血清白蛋白存在于血液中,分子量为66241,等电点为47〔1〕,主要维持血浆的胶体渗透压,其另一功效是和许多微溶于水的物质结合为易溶于水的复合物。酚类化合物对DNA有不同程度的损害〔2-5〕,对苯二酚在环境中轻易氧化为对苯二醌,对苯二酚和对苯二醌可以和DNA碱基形成加合物〔6-8〕,对人体危害极大。对苯二酚和对苯二醌是通过人血清白蛋白转运进入人体各器官。因此,探究血清白蛋白和对苯二酚和对苯二醌的相互功效具有重要意义。本文利用循环伏安法探究了对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为,并初步探索了在L半胱氨酸上牛血清白蛋白和对苯二酚及对苯二醌相互功效的机制。1材料和方法11仪器和试剂缓冲液:005mol/LNa2HPO4-005mol/LNaH2PO4-010mol/LNaCl缓冲溶液(用NaOH调pH);005g/LL半胱氨酸;01mol/LH2SO4;20000g/L对苯二酚。200000g/L牛血清白蛋白。MEC-12B型多功效微机电化学探析仪(江苏电探析仪器厂);金电极(直径1mm)为工作电极,铂电极为对电极,饱和甘汞电极为参比电极。12实验方法121L半胱氨酸在金电极上组装将金电极在置于005μmAl2O3粉末中反复抛光至镜面,用Microcloth抛光布抛光光亮,再用丙酮冲洗,用亚沸水超声波清洗。将金电极置于01mol/LH2SO4中于2V氧化5s,-035,15V于1V/s循环扫描5次,取出金电极,用蒸馏水冲洗干净,用磁力搅拌器在蒸馏水中清洗5min,将清洁后的金电极置于50g/LL半胱氨酸浸泡24h,取出金电极,用蒸馏水冲洗干净,用磁力搅拌器在蒸馏水中清洗5min,即得L半胱氨酸修饰金电极。所用水为3次亚沸蒸馏水。122电化学行为在500ml容量瓶中,加入010ml对苯二酚,500ml005mol/LNa2HPO4-015mol/LNaCl缓冲溶液,混匀,作循环伏安扫描。13量子化学计算对苯二酚和对苯二醌用半经验方法(AM1)进行分子几何构型初始优化,然后用密度泛函理论(DFT)在6-31G(d)水平进行全优化分子结构,在相同水平计算分子的分子前线轨道能量及静电荷。用Gaussian03软件完成所有计算。2结果21L半胱氨酸修饰电极的电化学行为特征(图1)由修饰电极于-060,08V范围内的循环伏安图可见,裸金电极上未见氧化还原峰存在;L半胱氨酸修饰电极在高电位的电流增大,溶液pH=730时,在-0068V产生一个氧化峰,这可能是羧基在较低的电位下被还原为羟基所致