新生大鼠高氧性肺损伤肺组织中AQP1、Na%2b-K%2b-ATPaseα1、1的蛋白和mRNA表达沐舒坦的干预作用.pdf

硕士学位论文论文题目新生大鼠高氧性肺损伤肺组织中AQP1、Na+-K+-ATPase α1、1的蛋白和mRNA表达及沐舒坦的干预作用研究生姓名严洁指导教师姓名肖志辉教授专业名称儿科学研究方向新生儿论文提交日期2013年3月新生大鼠高氧性肺损伤肺组织中AQP1、Na-K-ATPase α1、1的蛋白和mRNA表达及沐舒坦的干预作用中文摘要I新生大鼠高氧性肺损伤肺组织中AQP1、Na+-K+-ATPase α1、1的蛋白和mRNA表达及沐舒坦的干预作用中文摘要目的:通过建立新生大鼠急性高氧性肺损伤模型及使用沐舒坦干预并与正常新生大鼠对比:、肺组织的病理学改变;-1(AQP1)、钠钾ATP酶α1亚基(Na+-K+-ATPase α1)、钠钾氯共同转运蛋白-1(1)的表达变化,以探讨AQP1、Na+-K+-ATPase α1、1在急性高氧性肺损伤发病机制中的作用;、Na+-K+-ATPase α1、1的表达有调节作用,为临床防治新生儿高氧性肺损伤提供理论依据。方法:将120只出生满48小时的新生SD大鼠(雌雄不限)随机分为三组:I组:空气对照组;II组:高氧组(高氧+生理盐水);III组:沐舒坦组(高氧+沐舒坦);I组新生大鼠置于常压空气中饲养。II组、III组新生大鼠置于氧浓度维持在95%以上的氧箱中饲养。III组于实验第一天起每日早晚腹腔注射沐舒坦(75mg/kg)各一次。Ⅰ组与II组于实验第一天起每日早晚腹腔注射等量生理盐水各一次。每组按实验时间点分为1天、3天、7天三个亚组,每组于各实验时间点分别随机取实验鼠十二只,处死取材检测以下指标:(1)肺泡灌洗液中总蛋白含量;(2)取左肺称取其湿、干重,计算肺湿/干重比;(3)肺组织病理学观察:取右上肺行病理切片后观察肺组织病理改变;(4)肺组织AQP1,Na+-K+-ATPase α1,1蛋白及mRNA含量测定:取部分肺组织匀浆提取蛋白通过western blotting方法分别测定其蛋白含量;另取部分肺组织提取RNA,通过RT-PCR方法分别测定其mRNA含量。中文摘要新生大鼠高氧性肺损伤肺组织中AQP1、Na-K-ATPase α1、1的蛋白和mRNA表达及沐舒坦的干预作用II结果::空气组中的实验动物反应好,饮食佳,生长发育正常,无死亡。高氧组中的实验动物高氧暴露1天时反应好,肤色红润,离氧后无呼吸困难表现出现。高氧暴露三天后实验动物反应尚可,脱离氧气后呼吸频率稍加快。高氧暴露七天时实验动物精神萎靡,少吃少动,离氧后出现呼吸急促,唇色发绀,个别死亡。沐舒坦干预组的实验动物一般情况较高氧组有改善,无实验动物死亡。:空气组大鼠各时相肺组织未见病理改变,肺泡大小均一、肺泡腔内无液体渗出及细胞浸润。高氧组实验动物于高氧暴露1天时,肺泡结构完整,肺泡内可见少许红细胞,无明显渗出;3天后可见血管充血、肺间质水肿,肺泡内红细胞、炎症细胞浸润;7天时则出现肺组织水肿,结构紊乱,肺泡内出血、液体渗出、炎症细胞浸润明显加重。沐舒坦组的肺组织病理改变,肺泡腔内液体渗出,红细胞、炎性细胞浸润较高氧组明显减轻。(W/D):实验1天时,各组实验动物的肺组织W/D无明显差异(P>)。实验3天、7天时,高氧组实验动物的肺组织W/D较空气对照组有升高,沐舒坦组实验动物的肺组织W/D较高氧组有降低(P<)。(BLAF)中总蛋白(TP)含量测定:实验1天时,三组实验动物BLAF中TP含量差异不明显,无统计学意义(P>)。而实验3天及7天时,高氧组实验动物的BLAF中TP含量明显高于空气对照组(P<),而沐舒坦组的BLAF中TP含量则明显低于高氧组(P<)。,Na+-K+-ATPase α1,1蛋白表达水平的变化:(1)各组实验动物肺组织中的AQP1的蛋白表达水平在实验第1天无显著差异(P>)。实验第3天及第7天时,高氧组AQP1的蛋白表达水平较空气组有明显下降(P<)。沐舒坦干预组肺组织中的AQP1的蛋白表达明显高于高氧组,其差异有统计学意义(P<)。(2)高氧组的Na+-K+-ATPase α1的蛋白表达水平在实验第1天即低于空气对照组(P<),且于实验第3天、7天下降更明显(P<)。而沐舒坦组的Na+-K+-ATPaseα1蛋白表达水平在实验第3天、7天较高氧组有升高(P<)。(3)1的蛋白表达水平在实验第1天时无统计学差异(P>)。实验3天时,1蛋白表达水平较空气组有降低,1蛋白