盐酸胺溴索无菌检验方法学验证.doc

盐酸胺溴索无菌检验方法学验证河北凯威制药有限责任公司 2 2010 版要求,当建立药品的无菌检查法时,应进行方法的验证,以证明所采用的方法适合于该药品的无菌检查。 2010 版附录ⅪH无菌检查中薄膜过滤法。 ,当实验菌不大于 100cfu ,阳性对照有菌生长,阴性对照无菌生长,判定实验有效。比较供试品和阳性对照中试验菌的生长情况,供试品各试管中的试验菌在规定时间内均应生长良好。若同时满足上述条件,则表明供试品在所实验的条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计,可以按照此验证方法进行供试品的无菌检查。 :北京牛牛基因技术有限公司菌种:金黄色葡萄球菌【 (B)26003 】枯草芽孢杆菌【 (B)63501 】大肠埃希菌【 (B)44102 】生孢梭菌【 (B)64941 】白色念珠菌【 (F)98001 】黑曲霉【 (F)98003 】购自中国药品生物制品检定所。培养基及试剂:营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基(青岛日水)。稀释剂、冲洗剂: % 无菌蛋白胨水溶液样品:盐酸胺溴索注射液,规格 1ml:75mg ,批号: 141001-2 、 141002-1 、 141003-1 、 . 菌液制备取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌新鲜培养物接种营养肉汤, 3 30-35 ℃培养 18-24h ,取上述液体培养物 1ml 加入 9ml % 无菌氯化钠溶液中, 10倍稀释制成含菌数小于 100cfu/ml 的菌悬液备用。取生孢梭菌的新鲜培养物接种硫乙醇酸盐液体培养基 30-35 ℃培养 18-24h , 取上述培养物 1ml ,加入 9ml % 无菌氯化钠溶液中, 10 倍稀释制成含菌数小于 100cfu/ml 的菌悬液备用。取白色念珠菌新鲜培养物接种改良马丁培养基, 23-28 ℃培养 24-28h ,取上述培养物 1ml ,加入 9ml % 无菌氯化钠溶液中, 10 倍稀释制成含菌数小于 100cfu/ml 的菌悬液备用。取经培养一周的黑曲霉斜面培养物,加含 % 聚山梨酯 % 无菌氯化钠溶液 5ml ,洗下孢子,取 1ml 加入 9ml % 聚山梨酯 % 无菌氯化钠溶液中, 10倍稀释至约为小于 100cfu/ml 备用。 . 活菌计数取上述方法制备的六种试验菌的菌悬液,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌接种至营养琼脂平板,每种菌接种 2个平板,每平板 1ml , 白色念珠菌、黑曲霉接种至改良马丁琼脂平板 2 个,每平板 1ml ,置 23-28 ℃培养72h ,分别计数,取两平板的均值作为最终计数结果。活菌计数结果见下表。表 1. 活菌计数( cfu/ml ) 菌种 10-5 稀释 10-7 稀释 1212 金黄色葡萄球菌—— 46 41 大肠埃希菌—— 56 63 枯草芽孢杆菌—— 32 40 生孢梭菌 43 48——白色念珠菌 61 64——黑曲霉 27 34—— .验证方法供试液制备:取供试品,每 10支为一组,全部吸出溶液转移至 1瓶装量为 100ml/ 瓶的 % 无菌蛋白胨