人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其紫杉醇联合化疗方案的体外的分析.pdf

原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下, 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:童!l墅整日期关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名:垒:l量型堑导师签名: j!盆日期:!±:!:垫山东大学博士学位论文人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立及紫杉醇联合化疗方案的体外研究博士研究生: 博士生导师: 刘冠媛江森教授中文摘要论文一人卯巢癌紫杉醇耐药细胞株OC。/PIX3的建立及初步鉴定目的:为探讨卵巢癌紫杉醇耐药的发生机制,找出克服卵巢癌耐药的方法而建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株。方法:用紫杉醇为诱导剂,以卵巢上皮性癌紫杉醇化疗TP方案和I临床中紫杉醇大剂量冲击疗法的剂量及给药方法为模式,经过换算得出培养基终浓度,采用 300ug/ml2h反复间歇作用于卵巢上皮癌细胞株OC3细胞,建立了OC。/PIX3耐药株; 在耐药细胞诱导过程中以倒置显微镜观察细胞形态学变化,Giemsa染色分别对OC, 和OC3/PIX3细胞进行形态学观察;采用细胞计数法和MTT法观察三种细胞生长情况及其对PIX、cDDP、MTX、VCR、VP一16、TPT、,并计算耐药指数;细胞染色体核型分析观察紫杉醇耐药株与敏感株之间的染色体差异: 用流式细胞仪(FCM)检测OC,和OC,/PIX3细胞的细胞周期分布及P-gP的表达情况。结果:历时5个月建成OC,/PIX3耐药株,耐药性稳定,。0c,/PIX3 除对PIX耐药外,还对TPT耐药。在诱导过程中细胞的形态学表现:OC,/PIX3耐药细胞是通过大剂量(300ug/m1)的PIX短时间(2小时)作用于OC,细胞,诱导一部分细胞凋亡,同时另一部分细胞逐渐演变成耐药细胞。染色体核型分析显示OC、和OC3/PIX3细胞均为超二倍体,二者无明显差异(p>);FCM检测的细胞周期山东大学博士学位论文分布无明显差异(p>);P-gP的表达:OC,/PIX3耐药株与OC,相比,差异显著(P<)。结论:OC,,PIX3耐药株是大剂量冲击间歇给药法建立起来的对紫杉醇耐药的卵巢上皮性癌细胞株模型:耐药与P—gp的表达有关且耐药性稳定,为进一步研究人卵巢癌紫杉醇的耐药机制、进行抑制消减杂交筛选耐药基因和筛选耐药逆转剂提供了实验工具。关键词:耐药性;卵巢肿瘤:紫杉醇论文二人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC,伊Ix5的建立及初步鉴定目的:为探讨卵巢癌紫杉醇耐药的发生机制,找出克服卵巢癌耐药的方法而建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株。方法:用紫杉醇为诱导剂,以卵巢上皮性癌紫杉醇化疗TP周疗方案中紫杉醇的剂量及给药方法为模式,经过换算得出培养基终浓度,采用50ug/ml 24h反复间歇作用于卵巢上皮癌细胞株OC,细胞,建立了OC,/PIx5耐药株:在耐药细胞诱导过程中以倒置显微镜观察细胞形态学变化,Giemsa染色分别对OC、及OC。/PIx5细胞进行形态学观察:采用细胞计数法和MTT法观察细胞生长情况及其对PIX、cDDP、 MTX、VCR、VP一16、TPT、CTX及5一FU的耐受性,并计算耐药指数;细胞染色体核型分析观察紫杉醇耐药株与敏感株之间的染色体差异;用流式细胞仪(FCM)检测OC,及OC,/。结果:,/PIx5耐药株,耐药性稳定,。 OC,/PIX5除对PIX耐药外,还对MTX耐药。在诱导过程中细胞的形态学表现为: OC3/PIx5耐药株是以较大剂量(50ug/m1)的PIX长时间(24小时)作用于OC,细胞,导致大部分细胞死亡,只剩下极少的具有耐药性的细胞生存下来,并形成细胞克隆而逐渐恢复生长,进一步形成耐药株。染色体核型分析显示Oc,和OC,/PIx5 细胞均为超二倍体,二者无明显差异();FCM检测的细胞周期分布无明显差异(p<);p-gP的表达: OC3/PIx5耐药株与OC3相比,差异无显著性(P>)。山东人学博士学位论文结论:OC、/PIX5耐药株是以不同诱导方式建立起来的对紫杉醇耐药的卵巢上皮性癌细胞株模型:二者耐药指数不同;耐药与p-gP的表达关系不显著。耐药