人胃螺旋菌的分离培养研究.doc

人胃螺旋菌的分离培养研究.doc人胃螺旋菌的分离培养研究人胃螺旋菌(Gastrospirillumhominis,GH)是近来人们认识到的除幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)夕卜的另一•类与人胃炎有关的微生物,国内报道人群感染率明显高于国外。由于目前国内外对GH尚未分离培养成功,对Gh的研究仅限于组织学及形态学观察,影响了对Gh本身及其致病性方面的深入认识。我们自一接受胃镜检查的病人中,观察到有Gh和Hp混合感染存在,并最终纯化分离到了Gh和Hp。在对Gh的传代培养中,我们较系统地观察了不同培养条件及冷冻保存对其形态等的影响。现简要报告如下。,垣理堂检查证实其胃粘膜是中度慢性浅表性胃炎伴中度活动性胃炎表现。胃镜检查时在胃窦部钳取胃粘膜组织2块,置于含10%小牛血清的布氏肉汤中,放于4°C保存4d后进行以下实验。,采用2%液体尿素常规法,于4h及24h观察结果。,涂于含6%脱纤维绵羊血的布氏琼脂平板(含TMP5mg/L,万古霉素6mg/L及多粘菌素B4mg/L)中,将平板置于含10%C022>5%02及85%旅的混合气体培养箱中,37°C培养3d后涂片,在光镜下观察培养结果。在含10%脱纤维绵羊血的布氏琼脂平板中进行Gh-菌单菌落纯分离,并测定其尿素酶、氧化酶及过氧化氢酶活性。①将纯化的Gh菌分别接种于含6%与10%脱纤维绵羊血的布氏琼脂平板中,置混合气体环境,37°C培养3d,涂片检查细菌形态。②将纯化的Gh菌接种于含6%脱纤维绵羊血的布氏琼脂平板中,局部分别滴加灭菌的布氏肉汤、新鲜脱纤维绵羊血及冻融脱纤维绵羊血,并分别加盖一片灭菌的盖玻片,使覆盖部位呈厌氧状态。放37。C培养3d,观察细菌菌落生长情况及涂片观察细菌形态。③将纯化的Gh菌接利吁含10%小牛血清的布氏肉汤小管中(管口加灭菌绵塞),放混合气体环境,37°C培养3d后,直接涂片及离心沉渣涂片观察细菌形态。④将置于保存液(含10%蔗糖和50%小牛血清)中,-70°C保存30d后的Gh菌,接种于含10%脱纤维绵羊血的布氏琼脂平板中,37。C培养3d后,观察菌落生长情况、涂片观察细菌形态、测定其尿素酶、氧化酶和过氧化氢酶活性,并继续传代观察其形态变化。2结果胃粘膜组织尿素酶试验4h及24h均为阴性。细菌初代培养物涂片发现含有Gh和Hp两种菌。经单菌落分离分别得到Gh和Hp菌的纯培养,其中分离到的Gh菌株命名为Gh32。对Gh32的测定发现其氧化酶与过氧化氢酶均为阳性。并含有很强的尿素酶活性。Gh32在含有6%脱纤维绵羊血的布氏培养基上生长较差,菌落呈针尖状。光镜下可见细菌呈球形、忤形及短螺旋形,多数菌仅一个弯曲。在含10%脱纤维绵羊血的布氏培养基上生长良好,可长成Imm〜2mm直径单个菌落,光镜下可见细菌呈多螺旋状,螺旋数F1在1〜6个之间,且螺旋较密。Gh32在盖玻片下生长不良;在滴加布氏汤和未滴加任何液体的对照部位,细菌菌落较小,呈针尖状。在滴加新鲜血或冻融血而未被盖玻片覆盖处,菌落形态及光镜下细菌形态与在含10%脱纤维绵羊血