生理学实验报告蛙心灌流.doc

蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。2、视察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏运动的影响。二、【原理】将离体蛙心(失去神经支配的蛙心)保持在适宜的情况中,在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩,心脏正常的节律性运动需要一个适宜的理化情况,离体心脏也是如此,离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响,可以通过改变灌流液的某些身分,视察其对心脏运动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性,都与钠、钾及钙等离子有关。外源性赐与去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、盘算机收罗系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。套管夹、%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1:10000肾上腺素、1:10000乙酰肌碱、3%乳酸。【要领与步调】1、斯氏蛙心插管法(1)一只青蛙,双毁髓后背位置于蜡盘中,按前面的要领袒露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线,于动脉圆锥处结扎(动物个别小时,结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线,并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心偏向将动脉上壁剪一斜口。选择巨细适宜的蛙心套管,然后将盛有少量(套管内2~3cm高度)任氏液(内参加一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管,山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍退却,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖偏向推进,经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管,并使液面随心脏搏动而亡下移动,表明操纵乐成(不然需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液,调换新鲜任氏液。稳定住套管后,轻轻提起备用线,将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液),再将结线牢固在套管的小玻璃钩上,然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏,看清静脉窦的位置,于静脉窦下方剪断有牵连的组织,仅保存静脉窦与心脏的联系,使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液重复冲洗心室内余血,使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(~2cm),即可进行实验。(2)将插好离体心脏的套管牢固在支架上,用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多,以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连(如右图)。注意:勿使灌流液滴到传感器上。调治显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。实验视察(1)记录正常心搏曲线(2)%NaCI溶液灌流,并作好加药标记,视察心搏变革。待曲线氏插管装置出现明显变革时,立即吸去套管中的灌流液,同时做好冲洗标记,并用新鲜任氏液清洗2—3次,待心搏规复正常。注意:换液时切勿碰套管,以免影响描记曲线的基线,同时保持灌流液面一致(以下同)。视察可得,NaCI溶液会阻遏心脏搏动。(3)迅速用新鲜任氏液清洗2~3次,待心搏规复正常。向套管内参加1~3滴2%CaCI:溶液,视察并记录心搏曲线的变革。当出现明显变革时,立即调换任氏液,待心搏规复正常(如果规复迟缓,可多次冲洗)。(4)同法向套管中加1—2滴1%K