人载脂蛋白PApoPELISA试剂盒北京驰明瑞使用说明书.pdf

人载脂蛋白 P A p o P 使用说明书产品编号: 本试剂盒仅供科研使用,不得用于临床及诊断使用! 试剂组成名称规格数量保存包被平底微孔板 96 孔 1 可拆卸板 2 - 8 ℃密封冷藏酶结合物 6 毫升 1 瓶 2 - 8 ℃冷藏标准品 1 毫升 6 瓶 2 - 8 ℃冷藏显色剂 A 6 毫升 1 瓶 2 - 8 ℃冷藏显色剂 B 6 毫升 1 瓶 2 - 8 ℃避光冷藏终止液 6 毫升 1 瓶 2 - 8 ℃冷藏浓缩洗涤液( 100 倍稀释) 10 毫升 1 瓶 2 - 8 ℃冷藏使用说明书 1 份自备物品 1. 酶标仪( 尽量提前预热) 2. 微量加液器、吸头 3. 蒸馏水或去离子水以及滤纸操作步骤 1. 取出试剂盒, 于室温( 2 0 - 25 ℃)放置 1 5 - 30 分钟。实验过程应在室温( 2 0 - 25 ℃) 内进行。 2. 取出酶标板, 按照标准品的次序分别加入 100 μ l的标准品溶液于空白微孔中。 3. 空白微孔中加入 1 00 μ l的样品, 空白对照加入 100 μ l的蒸馏水; 4. 在各孔中加入 50 μ l的酶标记溶液; ( 不含空白对照孔) 5. 将酶标板用封口胶密封后, 3 7 ℃孵育反应 1 小时; ( 在孵育箱中保持稳定的温度与湿度) 6. 充分清洗酶标板 3 - 5 次, 保持各孔有充足的水压; ( 浓缩洗涤液以 1 : 100 的比例与蒸馏水稀释) 7. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干; 8. 各孔加入显色剂 A 、 B 液各 50 μ l ; ( 不含空白对照孔) 9. 20 - 25 ℃下避光反应 1 0 分钟; 10. 各孔加入 50 μ l终止液, 终止反应; 结果判断 1. 30 分钟内在波长 4 5 0nm 的酶标仪上读取各孔的 O D 值; 2. 百分结合率计算: 设 S 0 管计数为 B 0 , 各标准管或样品管计数为 B , 非特异管计数为 N S B , 则百分结合率计算公式如下: B / B 0 = ( B - N S B ) / ( B 0 - N S B ) × 10 0 % 3. l o g i t 计算: 各标准点或样品管的 l o g i t 值计算公式如下: logit = l n ( B / B 0 ) / ( 1 - B / B 0 ) 4. 将标准品的 O D 均值与标准品 0 点的 O D 均相除, 为标准点的百分结合率, 在 l o g - log i t 坐标纸上绘图。 5. L o g - l o g i t 双对数标准曲线: 坐标纸上横轴从左至右第一个 1 - 9 表示为第一个 10 进位, 第二个 1 - 9 表示为第二个 10 进位。第三个 1 - 9 表示为第三个 10 进位。坐标纸纵轴为百分比( 1 - 99 ) , 即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上, 同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率, 再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点, 此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度, 无须换算。 6. 人工处理: 以标准浓度取 l o g 值为横坐标, 对应的 log i t 值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标, 对应的 B / B 0 为纵坐标在 l o g i t - l o