专题1 ,是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。操作水平是DNA分子水平,操作环境是在体外。2.“分子手术刀”──限制性核酸内切酶。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今已从近300种微生物中分离出了约4000种限制酶。能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列;切开两个两个核苷酸之间的磷酸二酯键,形成黏性末端或平末端。3.“分子缝合针”──DNA连接酶。将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。种类:1):只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接起来2)T4DNA连接酶:既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低4.“分子运输车”──基因进入受体细胞的载体。作为载体的必要条件:能自我复制、有切割位点、有遗传标记基因等。载体的种类:细菌质粒、λ噬菌体的衍生物、:目的基因的获取;基因表达载体的构建;将目的基因导入受体细胞;目的基因的检测与鉴定。:从基因文库中获取、利用PCR提取目的基因、人工合成法。。原理DNA双链复制。条件:模板DNA;RNA引物;四种脱氧核苷酸;热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。方法:DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。:使目的基因在受体细胞中稳定存在;可以遗传给下一代;使目的基因能够表达和发挥作用。+启动子+终止子+标记基因 :目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。:农杆菌转化法(表达载体导入农杆菌,再让农杆菌感染植物细胞)这是双子叶植物和裸子植物中常用的基因转化方法;基因枪法,这是单子叶植物中常用的基因转化方法;花粉管通道法,这种方法十分简便经济,我国的转基因抗虫棉就是用这种方法得到的。:显微注射法,将基因表达载体提纯,用显微注射仪注射到受精卵中。:Ca2+处理受体细胞成为感受态细胞,再进行混合。,利用DNA分子杂交技术,目的基因DNA一条链(作探针)与受体细胞中提取的DNA杂交,看是否有杂交带。检测是否转录出了mRNA,利用DNA分子杂交技术,目的基因DNA一条链(作探针)与受体细胞中提取的mRNA杂交,看是否有杂交带。检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原-抗体杂交,看是否有杂交带。还可以根据其性状进行个体水平的鉴定。、:主要有Bt毒蛋白基因、蛋白酶抵制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。:使用最多的是病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因;抗真菌转基因植物中可使用的基因有几丁质酶基因抗毒素合成基因。:抗逆基因:调节渗透压的基因(
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