第十四章现代免疫学技术第一节 免疫微粒技术.docx

第十四章现代免疫学技术第一节 免疫微粒技术.docx第十四章现代免疫学技术第一节免疫微粒技术免疫微粒技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作为载体,包被上具有特界性亲和力的齐种免疫活件物质(抗原或抗体),使其致敏为免疫微粒,用于免疫学及其他生物学检测与分离的一项技术,作为载体的微粒通常是以某种高分子有机单体为原料,经过乳液聚合、悬浮聚合及辐照聚合等高分子聚合方法制备而成。由于制备材料及工艺不同,微粒的种类繁多,现己制成惰性微粒如聚苯乙烯胶乳微粒、活性微粒如竣化聚苯乙烯微粒、磁性微粒及标记微粒(用同位索、荧光索或酶标记)等四大类微粒,数量多达几十种。将制备好的微粒与抗原(或抗体)经物理吸附、化学偶联及生物索亲合亲桥联法等方法形成免疫微粒。广泛应用于各种可溶性大分子物质的检测、分离与纯化、细胞标记与识别等。近年來,微粒技术在核酸分子朵交、DNA与RNA的分离及PCR等研究领域亦显示出广阔的应用前景。一、胶乳微粒免疫检测技术胶乳微粒免疫检测技术是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的一种非放射性均相免疫测定法,可以对各种微量的抗原物质和小分子半抗原(加药物、团体激素等)进行精确的定量测定。根据特并性抗体致敏的胶乳微粒(一般为直径约lum的聚苯乙烯胶乳),与待测标本屮的相应抗原相遇吋发牛凝集反应,胶乳凝集程度与被测物的浓度呈函数关系,由此可测出标本屮待测物的含量。测定方法主要有粒子计数法和浊度法两种。二、免疫磁性微粒分离与纯化技术磁性微粒(icmicrospheres,MMS)是80年代初,用高分子材料和金属离子为原料,聚合血成的一种以金展离子为核心,外层均匀地包裹高分子聚合体的固相微粒。在液相屮,受外加磁场的吸引作用,MMS可快速沉降而自行分离,无需进行离心沉淀。因此,将MMS应用于免疫检测,可使操作过程大为简化。经过特杲性抗体包被制成免疫MMS,与检样屮的抗原结合形成免疫MMS—靶分子(或靶细胞)复合体,通过外加磁场的作用即可与其他成分分离开来。再以适半方式使复合体解离,在磁场吸引下除去游离的免疫MMS,即可获得纯化的靶分了或细胞。第二节 免疫组织化学技术免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。免疫组化技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫荧光技术,50年代以后逐渐发展建立起高度敏感,且更为实用的免疫酶技术。免疫组织化学的全过程包括:抗原的提取与纯化;免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体以及抗体的纯化;将显色剂与抗体结合形成标记抗体;标本的制备;免疫细胞化学反应以及呈色反应;观察结果。一、免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本屮的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光索发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量,以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的FI的。荧光免疫染色图:免疫荧光技术二、免疫酶细胞化学