emsa试剂盒使用方法介绍资料.doc

基因结构和功能系列 CAT#:131039-100 低温运输, -20 ℃保存即用型 EMSA 试剂盒 E lectrophoretic M obility S hift A ssay Kit 使用手册 产品及特点凝胶迁移或电泳迁移率实验( EMSA-electrophoretic mobility shift assay ), 也称 gel shift , 是一种研究 DN A 结合蛋白和其相关的 DN A 结合序列相互作用的技术, 可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究 DNA 结合蛋白, 目前已用于研究 RN A 结合蛋白和特定的 RNA 序列的相互作用。通过 EMSA 可以研究目的蛋白和特定的 DNA 序列的结合情况,从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。其原理如下: 本产品具有下列特点: 1. 一站式,使用方便,本试剂盒提供了进行 EMSA 实验的探针标记、蛋白和 DN A 结合以及 EMSA 上样液等主要试剂,使 EMSA 实验变得简单方便。 2. 非特异性结合低, EMSA 结合缓冲液中含有 poly(dI-dC) 等有效成分,其中 poly(dI-dC) 的浓度经过优化,可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合,同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。 3. 用户需自备待标记的 EMSA 探针、用于探针标记的同位素、 EMSA 胶配制的相关试剂。 4. 本试剂盒足够标记 10-20 次探针,足够进行 100 个蛋白和探针的结合反应。规格及成分成份编号 100 次包装 T4 Polynucleotide Kinase 131039A 100 U T4 Polynucleotide Kinase Buffer(10 ×) 131039B 100 μL Nuclease-Free Water 131039C 1 mL 探针标记终止液 131039D 100 μL 5M 醋酸铵 131039E 600 μL EMSA 结合缓冲液(5×) 131039F 200 μL EMSA 上样液( 蓝色, 10 ×) 131039G 200 μL EMSA 上样液( 无色, 10 ×) 131039H 200 μL TE 溶液 131039I 2 mL 使用手册 1份运输及保存低温运输, -20 ℃保存,有效期一年。自备试剂待标记的 EMSA 探针、用于探针标记的同位素、 EMSA 胶配制的相关试剂等使用方法一、探针的标记: 1. 探针标记的反应体系如下: 成份用量待标记探针(/ μ L)2μL T4 Polynucleotide Kinase Buffer(10 ×)1μL Nuclease-Free Water 5μL [γ-32P]ATP(3,000Ci/mmol at 10mCi/m L)1μL T4 Polynucleotide Kinase(5-10u/ μL)1μL 总体积 10 μL 按照上述反应体系依次加入各种试剂,加入同位素后, Vortex 混匀,再加入 T4 Polynucleotide Kinase ,混匀。 2. 37 ℃反应 10 分钟。 3. 加入 1 微升探针标记终止液,混匀,终止探针标记反应。 4. 再加入 89 微升 TE , 混匀。此时可以取少量探针用于检测标记的效率。通