高效液相色谱法同时测定血清中头孢哌酮与舒巴坦的含量.doc

高效液相色谱法同时测定血清中头孢哌酮和舒巴坦的含量色谱分析条件:以 C18 反相柱作分析柱,流动相组成为 四丁基氢氧化铵—乙腈(825 ∶ 175 , V/V) , 磷酸调整 pH 至 , 流速为 ,在紫外检测器 230nm 进行检测。本法的头孢哌酮和舒巴坦的最低检出浓度分别为 10mg/L 和 5mg/L ,至少在 10~ 1000mg/L 范围内呈线性,头孢哌酮和舒巴坦的绝对回收率分别是 %~ %和 %~ %, 批内和批间 RSD 分别是 %、 %和 %、 %。对 10 种临床常用的β- 内酰胺类药物进行干扰实验, 未发现有干扰峰。β- 内酰胺酶的产生已迅速波及到许多种类的细菌并且已经成为影响β- 内酰胺类抗生素的主要威胁, 以至许多头孢菌素对产β- 内酰胺酶的细菌并不具有“深谱”抗菌能力,舒普深(Sulperazon) 内含舒巴坦钠和头孢哌酮钠;由于舒巴坦(Sulbactam) 是一种强有力的β- 内酰胺酶抑制剂,而头孢哌酮(Cefoperazone) 是第三代头孢菌素类抗生素, 具有广谱的抗菌作用, 两者联合具有明显的协同作用, 是一种全新的广谱加上深谱的头孢菌素类抗生素, 在临床治疗中广泛使用。但如果用药不当会产生副作用或未达到合理用药的目的。因此, 测定血液中该药物的浓度, 对于研究不同疾病条件下该药物的作用机理、药代动力学以及制定合理的给药方案十分必要。用高效液相色谱法测定舒巴坦和头孢哌酮的方法已有很多报道,但绝大多数方法是在一个色谱条件下测定一种药物,为此, 笔者建立了一种能同时测定血清头孢哌酮和舒巴坦含量的高效液相色谱法。该法在保证足够的灵敏度、精密度和准确度的前提下, 达到操作简便、节约有机溶剂、节省人力和时间的目的。 1 、测定原理以外标法为基础,血清样品经甲醇沉淀蛋白,取上清液过滤,滤液直接进样,用 C1 8 反相柱进行色谱分析,紫外检测器在 230nm 波长下进行检测,以峰面积定量。 2 、材料和方法 标本的收集和保存抽取血液放入普通玻璃试管中( 勿溶血) ,分离血清后立即测定, 如不能立即测定应将血清密封,置 4℃冰箱或-20 ℃下保存,一周内测定。 仪器高效液相色谱仪:包括 Waters510 泵, 486 紫外可见光检测器, U6K 进样阀, PC800 色谱工作站, AST486 微机。平头微量注射器: Hamilton25 μL ,美国。样品过滤器: NewHydePark ,日本。样品过滤膜: μm ,美国。离心沉淀机: LXJ —Ⅱ型,南京第一医疗器械厂生产。 试剂标准物:头孢哌酮( 纯度为 %) 和舒巴坦( 纯度为 %) 均由中国大连辉瑞制药有限公司提供。溶剂: 四丁基氢氧化铵和磷酸为国产分析纯试剂; 乙腈和甲醇为国产色谱试剂;水为 Millipore 超纯水器生产。 溶液配制标准液:室温下分别配制浓度为 1g/L 的头孢哌酮和舒巴坦的甲醇溶液,密封。置 4℃冰箱保存,用前取出放至室温后使用。血清标准应用液:参考舒普深血清药代动力学资料, 确定两药物标准曲线各点的血清药物浓度(表 1) 。用健康正常人无药混