SCD1过表达影响高脂诱导鼠BRL肝细胞膜电位变化研究.pdf

· 检验医学年月第卷第期,,.
文章编号:—中图分类号: 文献标识码:
过表达影响高脂诱导鼠肝细胞膜电位变化研究
蔡德丰, 范建高, 陆元善, 蔡晓波
,深圳市儿童医院检验科,广东深圳;.上海交通大学医学院附属新华医院消化科,
上海;.上海交通大学附属第一人民医院检验科,上海;
.上海交通大学附属第一人民医院脂肪肝诊治中心,上海
摘要:目的探讨硬脂酰辅酶去饱和酶过表达影响大鼠肝细胞系凋亡作用的可能机制。
方法通过台盼兰染色检测不同浓度棕榈酸诱导肝细胞死亡率确定下游实验添加浓度。培养细
胞分组为非加药组和加药组。非加药组包括一般培养组、一般培养加阴性病毒组及一般培养加过
表达病毒组一;加药组包括一般培养加组、一般培养加阴性病毒和组及一般
培养加过表达病毒和组一。实时荧光定量聚合酶链反应检测表达的变化,
流式细胞术测细胞线粒体膜电位的变化,用膜电位正常细胞百分比一%表示改变。结果
与对照组相比,/诱导细胞死亡率明显上升.。诱导引起及组
表达下降,—组及一组表达明显上升;和组一%较低,一组一
%与对照组相似。结论用慢病毒载体感染肝细胞系,表达升高,增强细胞对饱和脂肪酸的
去饱和作用,过表达能降低诱导的脂毒性,使紊乱的得到恢复。
关键词:硬脂酰辅酶去饱和酶;棕榈酸;慢病毒载体;线粒体膜电位

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作者简介:蔡德丰,男,年生,学士,技师,主要从事脂代谢相关疾病研究。
通讯作者:陆元善,联系电话:
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饱和脂肪酸过多的摄人会引起多种代谢性疾双蒸水配制成母液,将母液放进℃恒温水浴箱
病,单不饱和脂肪酸具有重要的生理功能。硬脂孵育。%
酰辅酶去饱和酶—一, 的一培养基中,至,在
主要催化棕榈酰辅酶和硬脂酰辅酶水浴箱搅拌,待完全溶解,超净台下微量滤器除
去饱和为棕榈油酰辅酶和油酰辅酶,从而减菌,然后溶解于改良培养基中,配
少饱和脂肪酸的量,降低脂毒性。动物实验中我制.、.、./的孵育液,并置℃
们观察到随着高脂喂养时间的延长,大鼠肝细保存。
胞表达下调及细胞凋亡增加,
位,紊乱孑板接种细胞,每组设个复孑,于培养箱中
是细胞凋亡的重要特征。结合其他文献我们推测培养。当细胞融合率为%时分组。以无培
上调表达可能对缓解高脂引起的肝细胞凋养的细胞作为对照,分别用、和
亡有帮助,为此我们设计如下实验。通过大鼠/的孵育液共培养。胰酶消
肝细胞系和棕榈酸共培养,以观察化,.% 台盼兰染色~。取细胞悬浮液滴
肝细胞系表达变化、细胞凋亡及的改加到细胞计数板,静置,镜下观察,计细胞
变。然后通过已经构建成功的——一死亡率。取细胞死亡率下降显著对应的浓度
慢病毒载体转染大鼠肝细胞系,检测在进行下游试验。
过表达状态下,