快速高效偶联亲和层析介质试剂盒（试用装） 说明书.doc.doc

快速高效偶联亲和层析介质试剂盒说明书【产品名称】通用名称: CDI 预活化琼脂糖凝胶 4B 试剂盒。商品名称:快速高效偶联试剂盒。【包装规格】 20mL 活化柱+500mL 缓冲液/ 盒,附送亲和层析用空柱一支。【预期用途】快速高效偶联试剂盒适用于亲和层析填料的快速制备以及固相吸附、固定化酶等用途。【主要组成成份】●预活化琼脂糖凝胶 4B ●缓冲液【原理】本试剂盒系用优质琼脂糖凝胶 4B 活化后存放于保护液中和适合的偶联缓冲液制成,用活性咪唑碳酸酯基团偶联需要的配体。使用时, 保护液被洗去后就可使欲偶联的配体的氨基和活性咪唑碳酸酯反应, 脱去咪唑基, 使得配体的氨基通过共价键牢固的链接在基质上,即可方便得到高偶联效率的亲和层析填料。【存储条件和有效期】存储条件: 原包装应储存于 4-8 ?C。密封保存在阴凉干燥处切忌冷冻。有效期:一年。【适用仪器】本产品无需特殊仪器辅助使用, 只需要在操作时使用抽滤装置帮助抽去洗涤液,以免洗涤时间过长造成偶联效果不理想。附送的亲和层析空柱可安装适合的接口用于自动纯化仪。【配体要求】配体溶液的质量至关重要。配体需溶解于偶联缓冲液中并使得浓度大于 15mg/mL , 并且浓度越大, 偶联效果越好, 如已经溶解在其他缓冲液中,可用偶联缓冲液透析平衡。【偶联方法】方法一: 1 、预先准备好溶解在偶联缓冲液中的配体(可用直接溶解或透析方法制备) ,浓度>15mg/ml 或者更高,浓度越高偶联效果越好。 2 、将活化琼脂糖摇匀,倒入抽滤漏斗,加 5 倍体积的去离子水, 抽气至快干时拔掉抽气管,注意不可抽干,此步速度宜快。 3 、用配体溶液悬浮抽滤漏斗里的琼脂糖固体,摇床缓慢振荡(不可使用磁力搅拌器), 室温 3 小时或 4 摄氏度过夜, 然后洗净即可。洗出来的配体可回收使用。此方法适用于比较昂贵的配体。方法二: 1 、用干燥枪头吸去保护剂。制备配体在溶液 B 中的溶液(可用直接溶解或透析方法制备), 浓度>15mg/ml 或者更高, 浓度越高偶联效果越好。 2 、用 5 倍以上体积配体溶液悬浮抽滤漏斗里的琼脂糖固体, 4度摇床缓慢振荡(不可使用磁力搅拌器) ,过夜后用适当缓冲液洗净即可。洗出来的配体可回收使用。此方法适用于比较廉价的配体。注意: 如果配体不耐高 pH 条件, 可以用 1M 盐酸调节缓冲液至适合 pH。【装柱】塑料层析柱 1 、将层析柱固定,封闭层析柱下端出口,向柱内充入去离子水, 排开层析柱内空气, 先将垫片完全浸没于水面下方, 在保持水平的状态下,小心推向底部,避免垫片下方滞留气泡。 2 、先将介质混匀,打开层析柱下端出口,排出柱中去离子水;在液面低至距垫片 1~ 高度时封闭下端出口, 用导流棒沿内壁倒入介质或移液枪吸取介质, 将介质加入到层析柱中; 静置, 待介质自然沉降。 3 、从上端管口将另一垫片缓慢推至介质沉降平面,使介质表面保持水平状态,注意避免垫片与介质接触面滞留气泡。 4 、若使用一段时间后,如果层析柱流速减慢,可按 2)、3 )所述步骤重新装柱。 5 、注意整个操作过程无气泡。玻璃层析柱 1 、将层析柱洗净后固定;向柱中加入去离子水,排开柱子中的空气, 纯水排尽以前, 关闭柱子出口, 在柱内保留一定高度的去离子水。 2 、先将介质混匀,用导流棒沿内壁倒入介质或移液枪吸取介质, 将介质加