生化与分子生物学技术
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验操作及注意事项
实验分组（每人做一管，每组配一份胶）
认清试剂（试剂和吸管对号、量器的使用）
封管
分离胶配制与灌胶（浓度为6%，化学聚合，每组总体积为10ml，灌胶高度为7~8cm）
封正丁醇3mm（手法、高度、观察界面变化和判断凝固、时间掌握25min）
注意事项：
1、封管要严，防止漏液。
2、固定玻璃管要竖直，防止夹碎。
3、每组配一份胶，试剂与移液管对号，准确加量。
4、配胶后立即灌胶（用滴管灌胶，用后立即清洗）
5、正丁醇沿管壁缓缓加入
浓缩胶配制（浓度为3%，光聚合，每组总体积为8ml，,留1cm空隙加样）
倒掉正丁醇
灌浓缩胶
封正丁醇3mm（观察界面，判断凝固时间）
安装电泳槽（结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡）
注意事项：
1、倒掉正丁醇，用滤纸吸干再灌浓缩胶。
2、配胶后立即灌胶（用滴管）
3、灌胶后立即清洗滴管，防止胶凝固于管中。
4、撕掉封口膜，用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上（竖直，防漏）
5、加电极缓冲液（注意液面）
加buffer 样品处理并加样（20ul） 电泳（6mA/管，距底1cm时停止） 剥 胶
固定（时间5min）
染色（时间2min）
漂洗脱色至背景透亮
二、电泳基本原理及相关知识
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