凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒样稿.doc

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)
（BIOTIN标识POD法,适适用于细胞、组织样本）
使用说明书
一、TUNEL制品说明
凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA断裂情况，其原理是生物素（biotin）标识dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）作用下,能够连接到凋亡细胞中止裂DNA3‘－OH末端，并可和连接了辣根过氧化酶链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）存在下，产生很强颜色反应（呈深棕色），特异正确地定位正在凋亡细胞，所以在一般显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；因为正常或正在增殖细胞几乎没有DNA断裂，所以没有3'-OH形成，极少能够被染色。
本试剂盒适适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）凋亡原位检测。
本试剂盒特点
● 操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K 和DAB。
● 高灵敏度：能够单一检出早期凋亡细胞。
● 高特异性：能特异性染色凋亡细胞。
● 快速操作：整体操作约需3小时。
● 用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。
● 方便观察：使用光学显微镜观察试验结果。
● 高正确性：有阳性对照片制备方法，能够确定试剂盒有效性
使用注意事项
1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。
2． 因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。
3． 为避免试验误差、降低试剂损耗，提议使用精密度高进口微量移液枪及枪头。
4． TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生试剂损耗。
5. 为预防样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理载玻片或采取多聚赖氨酸铺片。
6. 固定好样本能够在-20℃70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞渗透性。
7. 使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以预防细胞样本脱落。
8. 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。
9. DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10 mg/ml）后，按说明书显色使用。
二、TUNEL试剂盒组分
组 份
Cat: KGA702
20 assays
Cat: KGA703
50 assays
Cat: KGA704
100 assays
储存条件
Equilibration Buffer
mL
mL
mL
-20℃
Biotin-11-dUTP
20μL
50μL
100μL
-20℃
TdT Enzyme
80μL
200μL
400μL
-20℃
50×Proteinase K
40μL
100μL
200μL
-20℃
Streptavidin-HRP
10μL
25μL
50μL
4℃避光
DAB
2mg
5mg
10 mg
-20℃
试剂盒以外自备仪器和试剂
光学显微镜、37℃孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。
二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2 、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液：苏木素或甲基