乳酸菌的分离培养.doc

乳酸菌的分离培养
保加利亚乳杆菌
组长：
组员：
实验目的： ；
、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术；
，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。
，以及实验室中常用的灭菌方法。
, 观察乳酸菌的基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目的测定的方法。
，熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
7．初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法，掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
，并了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代类型的多样性。
实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质；灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢；
自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代作用及其代产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
实验器材：
样品：含乳酸菌的酸奶
培养基：改良MRS固体培养基
蛋白胨 5g 牛肉膏 5g 酵母提取物 柠檬酸二铵 1g 水500mL
K2HPO4 1g MnSO4·4H2O 吐温80
琼脂 MgSO4·7H2O CaCO3 5g 葡萄糖10g 。
仪器用品： 500ml烧杯一个 100ml量筒一个 无菌培养皿12个
250ml容量三角瓶2个 5ml无菌移液管 1ml无菌移液管6只
15ml试管7只 高压灭菌锅 天平
水浴锅一个 玻棒一根 旋涡均匀器一台 镜台测微尺
电磁炉一个 棉花 纱布 目镜测微尺
牛皮纸 麻绳 接种环一个 盖玻片
酒精灯一盏 牛角匙 pH试纸 血球计数板
载玻片若干 恒温培养箱 酸度计 擦镜纸、吸水纸
液体石蜡 显微镜 载玻片 玻片架、洗瓶、酒精灯
火柴、滴管
药品：结晶紫，乙醇，草酸铵，碘，碘化钾，番红，KOH，NaCl，10％NaOH，2%氯化铁。
药品配制
结晶紫：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中）20ml，1g草酸铵于蒸馏水100ml。将两液混匀即成。
卢戈氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸馏水300ml即成。
蕃红溶液：，95%乙醇100ml，溶解后存于密闭的棕色瓶中。用时取10ml与80ml蒸馏水混匀即可。
%的吕氏美蓝染液：A液：，95%乙醇300ml；B液：% KOH