医学免疫学实习指导.doc

西安交通大学医学院免疫教研室
二00四年一月
主编:刘如意
主审:袁育康 范桂香
参编：谢 明 王军阳 周晓勃 雷艳君 任会勋 史 霖

医学免疫学
实习指导
目录
免疫学实验的目的和要求 2
实验室规则 2
第一篇 非特异性免疫检测 3
实验一 血脑屏障作用 3
实验二 吞噬细胞的功能试验 4
实验三 溶菌酶的溶菌作用 7
实验四 血清总补体活性测定（CH50单位测定） 9
第二篇 特异性体液免疫检测 11
实验五 凝 集 反 应 11
实验六 沉淀反应 17
实验七 补体结合反应 25
实验八 中和实验（ Neutrlization test ） 29
实验九 免疫标记技术 33
实验十 免疫血清的制备及效价测定 40
实验十一 体外抗体形成细胞检查法（溶血空斑实验 PFC） 43
第三篇 细胞免疫检测 46
实验十二 E-玫瑰花环形成实验 46
实验十三 淋巴细胞转化实验 48
第四篇：免疫病理反应 52
实验十四 豚鼠速发型过敏反应 52
实验十五 免疫复合物型超敏反应 53
实验十六 豚鼠结核菌素试验 55
实验十七 小鼠 DNFB 试验 56
免疫学实验的目的和要求
• 每次实验前必须做好预习，明确本次实验的目的、内容、操作要点和相关的理论知识。
• 进入实验室必须严格遵守实验室规则。
• 实验中听从老师指导，依照三严（严肃、严格、严密）要求进行实验，做好实验记录。
• 认真观察分析实验结果,写出实验报告。实验中遇到的有关问题,用科学的态度总结探讨其原因,培养分析问题和解决问题的能力。
实验室规则
• 进入实验室必须穿好白大衣。
• 除实验中必须的学习用品外，不要放实验台上。
• 实验室内不允许吃食品、饮水，严禁吸烟。
• 实验中一定要保持实验室安静，不要大声喧哗，严禁打闹。
• 实验要按老师要求操作，如发现问题要及时报告指导老师。
• 爱护实验器材，如有损坏应及时报告老师，需赔偿者按规定办理。
• 实验完毕要清理台面，需冲洗者按要求冲洗，需收回者按要求摆放整齐收回。
• 离开实验室时，一定要有专人负责关好门窗、水源及照明设备。
第一篇 非特异性免疫检测
实验一 血脑屏障作用
[基本原理]
血脑屏障由软脑膜、脉络丛的毛细血管壁和包在壁外的神经胶质细胞形成的胶质膜构成，起着天然的屏障作用，可以阻挡病原微生物及毒性产物、异物颗粒包括染料颗粒等从血流进入脑组织和脑脊液内，从而保护中枢神经系统免受损害。
[实验材料]
2只小鼠 。 1ml无菌注射器（配4号针头）。 5%台盼蓝水溶液。
生理盐水 。 眼科剪子和镊子等。
[实验方法]
• 用 1ml无菌注射器吸取5%台盼蓝水溶液经尾静脉注入两只小鼠体内，，更换注射器，。
• 5-10分钟后观察小鼠皮肤，尤其是眼、嘴的颜色变化。
• 于 30-60分钟，见小鼠眼、嘴呈现蓝色，即窒息死亡，腹部向下固定。
• 由头到尾沿背中线剪开皮肤，暴露皮下、肌肉和内脏，观察颜色变化。
• 小心剖开颅骨和椎骨，暴露脑和脊髓，与皮下、肌肉及内脏比较；并比较 2只小鼠有何不同。
[实验结果]
未经颅内注射的小鼠，眼、耳、鼻皮下及肌肉均呈现明显的蓝色，但脑、脊髓均未变色；而经颅内注射的小鼠上述部位可呈现明显的蓝色。
[注意事项]
• 台盼蓝水溶液要经过滤后方可使用。
• 尾静脉注射要从远断进针；如推注容易，表明进入了血管；如引起皮下凸起或发白，说明未进入了血管；拔出针头，从稍近断进针。
实验二 吞噬细胞的功能试验
巨噬细胞能吞噬鸡红细胞、中性粒细胞可吞噬多种细菌，如葡萄球菌等。将巨噬细胞和中性粒细胞分别与鸡红细胞、表皮葡萄球菌混合，孵育一定时间后涂片染色镜检；见巨噬细胞可吞噬鸡红细胞；中性粒细胞可吞噬葡萄球菌，可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数。在巨噬细胞中亦可见到鸡红细胞发生形态改变。具此可判断两类吞噬细胞的吞噬功能和消化功能，用以评价机体的免疫状态。
[实验目的]
证实吞噬细胞的吞噬作用。了解机体的非特异免疫防护作用。
一、 豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用測定（大吞噬） ：
[基本原理]
淀粉可以刺激豚鼠腹腔引起非感染性炎症滲出，在腹腔局部出现较多巨噬细胞，巨噬细胞则能吞噬注入腹腔的鸡红细胞等较大异物。
[实验材料]
• 实验动物：豚鼠
• 鸡红细胞悬液：从鸡翼下静脉或心脏取血，按 1 : 5比例保存于Alsever氏保养液中，放4 C°