高效氯氰菊酯抗雄激素效应及机制研究.pdf

结论参考综述攻读致谢论文论文 ARE antagonist BPA 13-cyp 13-CaI CAT DBD EDCs EDSTAC androgen responsive element 雄激素效应元件 antagonist biophenol A 拮抗剂双酚A beta-cypermethrin 高效氯氰菊酯 13-galactosidase p-半乳糖苷酶 chloramphenicol acetyl transferase 氯霉素乙酰转移酶 DNA binding domain DNA结合域 endocrine disrupting chemicals 内分泌干扰物 Endocrine Disruptor Sereening and 内分泌干扰物筛选和 Testing mittee FQPA FoodQuality Protection Act gene transfect GR LBD linuron PBDEs gene transfect glucocorticoid receptor ligandbinding domain linuron Polybrominated diphenyl ethers 鉴定咨询委员会食品质量保护法基因转染糖皮质激素元件配体结合域利谷隆多溴联苯醚 P,P’一DDE P,P’-dichlorodiphenyldiochloroeth P,P’-二氯二苯二氯乙 ylene pyrethroidpesticides pyrethroidpesticides 烯拟除虫菊酯类农药 5a-DHT 5a-dihydrotestosterone 5a-双氢睾酮 2 高效氯氰菊酯抗雄激素效应及机制研究摘要高效氯氰菊酯()属于拟除虫菊酯类农药,现被广泛使用于农业生产中。动物研究表明该农药对精子数量、形态和运动能力有损伤作用,人群资料也进一步显示其对男性生殖系统存在潜在性危害。高效氯氰菊酯是重要的环境内分泌干扰物,其致雄(男)性生殖毒性的毒作用机制较为复杂,可能与雄激素受体(AR) 介导的信号通路有关。受体报告基因实验也称受体转录激活试验,是EPA推荐的用于环境内分泌干扰物(EDCs)筛选的in vitro方法之一。研究表明,这种方法即可检测化学物与受体结合的能力,又可检测结合后引起的生物学效应,而且能够区分激动剂和拮抗剂,与受体结合试验相比可提供更多的信息,因此成为EDCs 筛选的有力工具。本研究将动物实验和受体报告基因试验结合,阐明13-eyp的抗雄激素效应及其作用机制,为揭示拟除虫菊酯类农药的抗雄激素效应机制提供重要依据,并为其他化学物质的研究提供新的思路和技术平台。 3 第一部分高效氯氰菊酯对成年雄性大鼠生殖系统的影响目的选择高效氯氰菊酯(D-cyp)为研究对象,研究其对雄性生殖系统的损伤作用及机制。方法选择成年雄性啮齿类动物15天染毒试验,按体重将30只成年雄性SD 大鼠随机分为中、低剂量和对照共三组,每组lO只。中、低剂量组灌胃量分别按 30mg和15 mg D-cyp/kg BW灌胃15天,对照组则每天给与同体积玉米油。15 天后称大鼠终重并处死,将睾丸、附睾和精囊取出分别称重。一侧睾丸用于精子头计数实验,另一侧睾丸通过对其做免疫组化实验来观测雄激素受体(AR)的表达。结果与对照组相比,给药组的精子头计数和每日精子生成量明显减少(P<),且AR水平也显著降低,±、 ±-,差异有统计学意义(P<)。结论p-cyp对雄性生殖系统是有损伤作用的,抑制AR的表达可能是其引起精子数下降的重要机制之一。关键词环境内分泌干扰物;高效氯氰菊酯;雄激素受体;精子生成;农药第二部分高效氯氰菊酯的雄激素受体报告基因试验研究目的通过AR报告基因试验检测p-cyp是否是AR拮抗剂。方法建立以氯霉素乙酰转移酶(CAT)为报告基因的雄激素受体(AR)报 4 盆刿匡堂堕塑±堂焦迨塞告基因试验。将表达AR的质粒AR/、重组报告基因质粒pMMTV-CAT 和阳性对照质粒pSV-,() 为阳性对照。CV-I转染后用高效氯氰菊酯(p-cyp)染毒,通过检测该物质作用下 CAT的蛋白表达水平,间接反应内源性基因的表达情况,进一步确定13-cyp与内源性雄激素竞争结合AR的能力。结果IB-cyp在lO一7 CAT的表达,并且在浓度为1x10-5 ,其IC50 为(:)x 10一M。结论13-cyp属于AR拮抗剂,是通过抑制AR