梯度洗脱.doc

对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。
液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。
梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。
梯度洗脱特点：
提高柱效
改善检测器的灵敏度
当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。
梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。
梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。
梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。
调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。
最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为2倍的t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。
梯度洗脱的形式
线形梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化与　　　　　梯度时间成线性比例。在一定时间内　　　　　流动相强度越大，直线斜率越大。
指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时　　　　　间变化称指数关系 。
凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加　　　，强度变化加快。
凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度　　　速度变化慢。
折线形：
 
选择适当的A,B溶剂
强度：A溶剂为低强度；
　　　B溶剂为高强度，B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱，并使各谱带的k’值在2-　　　　　10之间。
初步分离
　　选择好A、B两种溶剂，先按中等强度进行配比，在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。
梯度形式选择
经过初步分离，一般可能得到3种分离色谱图：
① 前半部峰重叠，后半部峰分离度过大，保留时间太长；
　 可选择线形梯度，或凹形梯度。
② 前半部分离良好，后半部峰重叠；
　 可选择凸形梯度。
③ 前后两部分分离良好，中间部分峰重叠。
　 可选择折线梯度。
　
梯度洗脱一般应给出下列条件：起始液（A液）、终止液（B液）、起始时间（min）、终止时间（min）、梯度速度（B% /min）。