革兰氏染色原理.ppt

G﹢菌:细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解, 缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,沙黄复染后呈红色。革兰氏---染色原理: 第一步: 结晶紫使菌体着上紫色第二步: 碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物, 分子大,能被细胞壁阻留在细胞内。第三步: 酒精脱色,细胞壁成分和构造不同,出现不同的反应。第四步: 沙黄复染,增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌。溶菌酶对细胞壁的作用◆可切断 NAM 和NAG 之间的?—1,4糖苷键, 引起细菌裂解。◆对Gˉ菌,在 EDTA 存在下,受溶菌酶作用。◆溶菌酶处理后的菌细胞应保存在弱高渗( ~ M)蔗糖液中。青霉素对细菌细胞壁的作用 Penicillium 与转肽酶结合,而使该酶失活, 抑制了侧链末端的丙氨酸与五肽桥的连接,破坏了细菌细胞壁的完整性(即抑制肽聚糖的合成),因此, Penicillium 仅对正在生长着的细菌, 且主要是对 G +菌有效。﹙6﹚周质空间( periplasmic space ) 又称壁膜空间。指位于细胞壁与细胞膜之间的狭窄间隙,革兰氏阳性细菌与阴性细菌均有。内中含有多种蛋白质,例如蛋白酶、核酸酶等各种解聚酶,运送某些物质进入细胞的结合蛋白,以及趋化性的受体蛋白等。 Table 8. Representative periplasmic proteins in E. coli. Binding proteins For amino acids (. histadine , arginine ) For sugars (. glucose, maltose) For vitamins (. thiamine, vitamin B12) For ions (. phosphate, sulfate) Biosynthetic enzymes For murein assembly (. transglycosylases , carboxypeptidases , transpeptidases ) For fimbrial subunit secretion and assembly (. chaperonins ) Degradative enzymes phosphatases proteases Detoxifying enzymes Beta- lactamases (. penicillinase ) Aminoglycoside - phosphorylating enzymes ﹙7﹚细胞壁缺损型细菌①原生质体 protoplast ②球形体 spheroplast ③L型细菌 L-form ★原生质体的特点: 1、无细胞壁,为圆球形 2、对环境敏感:渗透压,震荡,离心,易溶菌 3、有鞭毛,而不能运动 4、不被噬菌体感染(因为失去吸附位点) ﹙﹙二二﹚细﹚细胞膜胞膜( ( cytoplastic cytoplastic membrane membrane ) ) :细胞膜是紧贴细胞壁内侧包围细胞质的一层柔软,富有弹性的半透明薄膜。 2. 2. 观观察分离方法: 察分离方法: (1)质壁分离 (2) 选择性染色 (3) 电镜技术 (4) 溶菌酶处理 1972 年 Singer 和 Nicolson 提出的细胞膜液态镶嵌模型 4. 4. 细细胞膜的胞膜的结结构与化学构与化学组组成成细胞膜液态镶嵌模型认为:膜是由球形蛋白与磷脂按照二维排列方式构成的流体镶嵌式, 流动的脂类双分子层构成了膜的连续体,而蛋白质象孤岛一样无规则地漂流在磷脂类的海洋当中。 Figure 10. Fluid mosaic model of a biological membrane. In aqueous environments membrane phospholipids arrange themselves in such a way that they spontaneously form a fluid bilayer . Membrane proteins, which may be structural or functional, may be permanently or transiently associated with one side or the other of the membrane, or even be permanently built into the bil