分类号: 密级: 学号: 2011 208003 单位代码: 10759 石河子大学博士学位论文人嗜吞噬细胞无形体 Msp2、 Ats-1蛋白与宿主细胞潜在蛋白互作研究学位申请人王勇陈创夫教授指导教师张丽娟研究员申请学位门类级别农学博士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研 究方向免疫遗传与抗病机理所 在学院动物科技学院中国·新疆·石河子 2014年 6月万方数据万方数据 The s tudy of interaction of Anaplasma phagocytophilum Msp2、 Ats- 1 proteins and ho st cell potential protein(s) A Dissertation Submitted to Shihezi University In Fulfillment of the Requirements for the Degree of Doctor of Agriculture By Wang Y ong (Animal ics Breeding and Reproduction) Dissertation Advisor: Pro. Chen Chuan gfu Pro. Zhang Lijuan June, 2014 万方数据万方数据 I 课题来源 973 国家重点基础研究发展计划项目名称及编号: 重要人兽共患胞内寄生菌病流行特征及病原致病机制研究( 2010CB530200) 课题名称及编号: 无形体病原分离及致病机制研究( 2010CB530206) 万方数据万方数据万方数据万方数据 I 摘要人粒细胞无形体病( Human granulocytic anaplasmosis, HGA)是一种新发蜱传人兽共患传染病,发病病原嗜吞噬细胞无形体( Anaplasma phagocytophilum)是一种专性胞内寄生菌,革兰氏阴性,可寄居于哺乳动物细胞中, 也可生活在硬蜱中并传播。人粒细胞是嗜吞噬细胞无形体生存、繁殖的重要场所。 HGA临床表现有发热、头痛、肌痛、白细胞减少和血小板减少、肝酶活性水平升高等,与某些病毒性传染病极其相似,极易发生误诊,重症者可引起死亡。家畜(马、犬和反刍动物)粒细胞无形体病临床症状跟 HGA 基本相似。嗜吞噬细胞无形体经蜱叮咬进入机体后主要存在于粒细胞中,形成含菌包涵体,且不会被溶酶体融合,扰乱宿主细胞免疫功能,有利于胞内生长繁殖。嗜吞噬细胞无形体侵入粒细胞过程中,其表面膜蛋白最先与宿主细胞发生相互作用,完成细菌侵入机体的黏附内吞过程;嗜吞噬细胞无形体进入粒细胞后,一些分泌蛋白、包涵体膜蛋白等对病原的包内寄居有重要作用,但其分子致病机理尚不完全清楚。近年来粒细胞无形体病特别是 HGA案例世界范围内有增加趋势,引起世界各国的广泛关注。我们对我国人粒细胞无形体病( HGA)流行病学进行了调查,临床表现为重症型。本文拟对我国部分地区无形体病流行情况进行调查,并对人粒细胞无形体致病过程中的表面蛋白、分泌蛋白作用进行了探讨。本研究开展如下工作: 1. 了解云南曲靖、山西吕梁两省/ 市鼠传无形体流行特征。无菌条件下收集的鼠脾脏样本用组织破碎仪破碎后试剂盒抽提基因组,巢式 PCR检测疑似阳性产物送测序并进行序列信息分析。研究结果表明, 云南曲靖优势鼠种为褐家鼠和黄胸鼠,立克次体总阳性率为 %,细菌有立克次体属( Rickettsia )、埃立克体属( Ehrlichia )、无形体属( Anaplasma)、沃尔巴克体属( Wolbachia)等多个种属,提示中国云南曲靖鼠类自然感染病原种类较复杂,变异较大。山西吕梁优势鼠种为黑线姬鼠,立克次体总阳性率为 %,立克次体种类仅有查菲埃立克体( Ehrlichia chaffeensis)。由此得出结论是云南曲靖、山西吕梁两地区啮齿动物中存在立克次体自然感染现象,啮齿动物可能是该地区立克次体病原的一个自然疫源宿主。 2. 构建人单核细胞白血病细胞( THP-1) cDNA文库。提取人单核细胞白血病细胞 THP-1总 RNA,反转录获得第一链 cDNA, LD- PCR扩增获得双链 cDNA,用 CHROMA SPIN+TE-400 纯化柱纯化的双链 cDNA与 pGADT7- Rec载体共转化酿酒酵母 Y187,构建 cDNA文库。得到了人 THP-1细胞 cDNA文库的库容为 ×10 6,重组率为 %, 插入片段大小在100- 3000bp, 且片段条带丰度位于500-2000bp之间,已达到建库要求。为进一步筛选与嗜吞噬细胞无形体 LZ- HGA- Agent MSP2蛋白、 Ats-1蛋白相互作用的 THP-1细胞潜在蛋白奠定了基础。 3.
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