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高效液相色谱法测定发酵液中利巴韦林含量
天津科技大学 代谢工程研究室 作者xjg
试验目标：经过利用高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）测定发酵液中利巴韦林含量，熟练掌握HPLC。
试验方法：高效液相色谱法，采取C18反相色谱柱，流动相为4%乙腈和96%水，流速1ml/min，检测波长207nm，℃，自动进样器进样量5mL。
试验原理：利巴韦林为广谱抗病毒药品，对DNA和RNA病毒均起抑制作用，在207nm下有最大吸收峰；
色谱法分离原理是溶于流动相(mobile phase)中各组分经过固定相时，因为和固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）大小、强弱不一样，在固定相中滞留时间不一样，从而前后从固定相中流出，又称为色层法、层析法。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而快速发展起来。它和经典液相色谱法区分是填料颗粒小而均匀，小颗粒含有高柱效，但会引发高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱；
反相色谱法：通常见非极性固定相（如C18、C8），流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等和水互溶有机溶剂以调整保留时间。适适用于分离非极性和极性较弱化合物。
仪器和试剂：高效液相色谱仪；色谱柱：SinceHome C18，5 mm，250× mm，P/N：
91182545，S/N：902200；保护柱；乙腈（色谱级）；纯净水；利巴韦林（纯品）；；
试验步骤：
1 试验准备
用纯净水配制不一样浓度（,,,,,）利巴韦林标样；将利巴韦林发酵液1rpm离心5min，用纯净水稀释50倍；
，分别装入不一样进样瓶；
，将过滤好乙腈和水分别装入高效液相色谱仪（液E）C瓶和A瓶；
安方向分别安装保护柱和色谱柱；
向高效液相色谱仪插入计费卡，开启高效液相色谱仪和计算机；设置相关信息（如水和乙腈实际体积，最高柱压，操作者，存放目录等）；
分别对水和乙腈进行在线脱气（旋钮旋松，流速3ml/min,时间约3