南昌大学
硕士学位论文
R7基因后对树突状细胞在体外成熟影响的研究
姓名:林玉平
申请学位级别:硕士
专业:内科学(心血管病学)
指导教师:王梦洪;涂小文
201206
摘要目的和意义:近年来,诸多研究表明免疫炎症反应参与冠心病的发病机制,。由于趋化因子受体在未成熟的树胞表面高表达,推测可能与某墒煊凶琶芮械墓叵怠A硗庠诿庖叻应的过程中主要起着摄取抗原的作用,成熟的闳】乖实莞鳷淋巴细胞引起免疫炎症反应。能否调控某墒炷壳吧胁磺宄1疚通过体外原代分离培养大鼠骨髓源性树突状细胞珺徊酵ü,分泌是逐渐增高的L教殖聊珻蚝蠖訢成熟的影响,从而通过抑制某墒煳6鲋嘌不孕脑嗖∧酥劣谛难9疾病的治疗提供新的思路。方法:体外分离培养及其鉴定大鼠骨髓源性树突状细胞:取出雌培养基冲洗骨髓腔收集骨髓细胞,,获得霭械愕膕,通过检测蛋白筛选最佳的靶点。本研究分为鲎椋菏突状细胞琲砻娴捅泶铮诔墒斓氖魍蛔聪趋化因子受体的扇诺穆《驹靥澹徊阶H緄;转染后,通过和和蛋白的表达以及一的含量捎谙喙匮芯勘砻魉孀臘的成熟培养上清液中雄不限笫笏轮ü晒呛碗止牵注射器吸取含%腞狢/,培养至第焓占∠赴即,继续用..痬蟹只嘌话阒炜苫竦贸墒斓树突状细胞。分别收集第臁天、天及天ü翁Ъ傲式细胞仪检测细胞表型对屑āS杉?、阴性对照组为转染—甃腄,空
结论:慢病毒载体构建成功,转染《驹靥搴驜白对照组为正常培养的S蒙秆〕,稳定转染旌笸ü齊蚖检测各组和蛋白的表达水平,,通过ḿ觳釩聊蠖訢生长增殖情况的影响。结果:,圆形,无树突;培养至后期熳笥呈半悬浮半贴壁状态,圆形或椭圆形,部分细胞可见树突状突起。流式细胞表型的鉴定结果示培养初期低表达,。?提供霭械悖齊蚖筛选出最佳靶点为一其浓缩病毒滴度为/.转染《咀H竞天,.%左右的泶颎,结果显示泶情况实验组%与空白对照组%和阴性对照组士%相比哂型臣蒲б庖澹籛结果示:..ズ鸵跣远照组%..痬鸵跣远哉组/..痬鸵跣远哉兆../相比哂型臣蒲б庖澹籑结果示:沉默后实验组与空白对照组和阴性对照组相比哂型臣蒲б庖濉的和蛋白表达水平明显下调,细胞培养上清液中棵飨增高和含量明显下降,同时纳ぴ鲋城榭鍪艿矫飨缘囊种疲籆基因沉默后具有抑制墒斓淖饔茫梢晕O乱徊接盏糄对相关抗原氧化性低密度脂蛋白,。产生免疫耐受做好前期工作,可能为冠心病的治疗提供新的靶点。关键词:;树突状细胞宦《驹靥澹籖干扰摘要
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第乱冠心病已成为当今威胁人类生命健康的主要疾病之一。尽管近年来诸多新型治疗手段缰Ъ苤瘟啤⒐诼龃钋乓约案上赴浦驳和一些新型药物的使用使得冠心病患者的平均寿命得以明显的延长、生活质量得以明显的改善,但是其发病率和死亡率仍旧居高不下。冠心病的主要病因是动脉粥样硬化性病变,而动脉粥样硬化的发病机制一直被认为是多因素共同作用的结果,对其治疗亦是最大限度的改善患者的症状,很难从根本上防止疾病的发生,因此探寻动脉粥样硬化的具体发病机制已成为治疗冠心病的一个新的思路。近年来诸多研究表明免疫炎症反应可能参与动脉粥样硬化的发病机制【,如树突状细胞将摄取的抗原肽呈递给巴细
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