糖、脂、蛋白质还原实验.doc

实验 生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
教学目的
初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
实验原理
　　 　　　 　 １．可溶性还原糖+斐林试剂à(浅蓝—棕－)砖红色沉淀
呈色反应　 　 ２．脂肪+苏丹Ⅲ染液à橘黄色(+苏丹Ⅳ染液à红色）
　　 　3。蛋白质＋双缩脲试剂à紫色反应
实验程序
一、可溶性还原糖的鉴定
选材：含糖类较高、白色或近于白色的植物组织。
　 　　 制浆
　
制备组织液　 过滤(用一层纱布）
取液
呈
色
反
应
(注：斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后使用)
结论:可溶性还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀。
关键步骤：斐林试剂现用现配及用量.
二、脂肪的鉴定
取材：花生种子（浸泡3－4小时)将子叶削成薄片
　(1)最理想的薄片
　　 　（２）在薄片上滴２－3滴苏丹Ⅲ染液（2-3min）
制片 （3）去浮色
(4)制成临时装片
观察：在低倍镜下寻找已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。
结论：脂肪能被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色。
关键步骤：子叶削成理想薄片。
三、蛋白质的鉴定
选材与制备组织样液：卵清或黄豆(浸泡1-2d）
呈
色
反
应
结论:蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应.
关键步骤：先加试剂A再加试剂Ｂ。
实验的注意事项
还原性糖:分子中含有醛基的糖。如葡萄糖、果糖、麦芽糖。但是蔗糖不是.
斐林试剂很不稳定，帮应将组成斐林试剂的甲液（0．1ｇ／ml的NａOH溶液）和乙液(）分别配制、储存,使用时,再临时配制，将4－5滴乙液滴入2ml甲液中，配完后立即使用.
双缩脲试剂的使用，应先加试剂A（0．1ｇ／ｍl的NaOH溶液）,造成碱性的的反应环境后,再加试剂B（0．0１ｇ/ｍl的CuSO4溶液).否则，紫色会被Cｕ（OH)2的蓝色遮蔽。
【同类题库】
１．在还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，最佳的一组实验材料是（ ）
①甘蔗的茎 　②油菜子 　③花生种子　 ④梨　
⑤甜菜的块根 　⑥豆浆 ⑦鸡蛋清
A．④⑦⑥ 　 　 　 B．⑤①⑦　 C。①②⑥ 　 　D.④③⑥
２．使用斐林试剂检验还原性糖的正确顺序是（ 　）
①制组织样液
②加入2mｌ
③加入0．０1g/ml　CuSO4溶液
④加入0。0５ｇ/ｍl CuSO4 溶液
⑤煮沸2 分钟
⑥出现砖红色沉淀
Ａ．①→②→③→⑤→⑥ 　 　 　 B．①→(②+③)→⑤→⑥
C。①→②→④→⑤→⑥　 　 　 　 　 　 Ｄ．①→（②+④)
→⑤→⑥
3。用斐林试剂鉴定可溶性还原性糖时，溶液的颜色变化过程为（ 　)
A。浅蓝色→棕色→砖红色　 　 　 　 　 　 B．无色→浅蓝色→棕色
C．砖红色→浅蓝色→棕色 　 　 　 →绿色→无色
4．有关斐林试剂和双缩脲试剂的说法正确的是（ ）