实验八酵母核糖核酸的分离及组分鉴定、dna的tm值测定ppt演示文稿.ppt

实验八 酵母核糖核酸的分离及核酸组分鉴定
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一、目的
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
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二、原理
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
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三、操作
1、提取：将2 g酵母悬浮于10ml 10%NacL溶液中（50ml锥形瓶），经膨胀、摇匀后置100℃沸水浴上加热30min后，冷却。离心（3,500r/min）10min,将预冷的 酸性乙醇溶液以等体积倾入上清液 中。注意要 边搅拌一边倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（3，000r/min）5min。 ，再用SC溶液定容至10ml。
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2、 DNA和RNA成分鉴定：
1）、嘌呤碱
取两支小试管，， 10% ，观察沉淀物及其颜色的变化
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2）、核糖 、。放沸水浴中10min。注意溶液是否变成蓝色，说明该方法的专一性。
3）、磷酸：取两支试管，加入DNA 。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在，两支试管的颜色的深浅度为什么有差异。
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四、思考题
p43页3、6、7
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实验九 DNA Tm值的测定
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一、目的
正确理解DNA 的Tm值的定义及测定Tm值的意义；
掌握DNA Tm值的测定方法；
了解DNA变性、复性的机理与条件。
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二、原理
当DNA在稀盐溶液中加热到80-100℃时，双螺旋结构即发生解体，两链分开，形成无规则线团。与此同时发生了一系列理化性质的变化，其中260nm的消光值增高（增色效应）；粘度降低；浮力密度降低等。DNA的这些变化是属于爆发式的，变性作用发生在很窄的温度范围内。通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为该DNA的熔点或熔解温度（melting temperature）,用Tm表示，DNA的Tm值一般在70-85℃之间。变性后的DNA在温度降低的过程中得以复性，A260nm值再次下降到接近自然状态的消光值。
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