ssr标记和scar标记对片形吸虫分类鉴别的研究.pdf

西南大学
硕士学位论文
SSR标记和SCAR标记对片形吸虫的分类鉴别研究
姓名:唐远菊
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:聂奎
20080501
昙呛蚐昙嵌云挝娴分类鉴别研究要预防兽医专业硕士研究生唐远菊聂奎教授指导教师鴖景炝膄丑痛笃忍卵厶沲璽。牛、羊片形吸虫病呈全球性流行,本课题从重庆、四川、广两采集不同宿主片形吸虫成虫样本,并用昙呛蚐昙摘要片形吸虫是一种危害牛羊等反刍兽和人类的寄生性蠕虫,常见的有两个种:肝片吸虫在全球每年造成约亿美元的经济损失。同时该病的人畜共患性也给疫区人民的身体健康带来严重危害。两种片形吸虫在形态上及其相似,但在虫体抗原性、免疫原性、对宿主的致病性、对药物的敏感性等方面均存在差异,所以正确鉴别片形吸虫的种类,不仅是研究片形吸虫的基础及前提,且也对防治片形吸虫病具有重要意义。长期以来,片形吸虫的分类鉴定主要依据成虫的形态、生活史、流行病学等特征来进行,这在分类学的发展上曾经起了重要的作用。但由于片形吸虫种内个体差异较大,同一虫种又因宿主种类、宿主反应的不同而异,导致虫体的形态不规则。鉴于传统分类方法的局限性,研究人员不得不另辟途径。随着细胞学、分子生物学的发展,学者们开始从细胞、分子水平探讨片形吸虫的遗传变异及分类,其中分子遗传学分类方法是近年来的研究热点。虽然研究者建立了多种分类方法,但得到的结果却存在一定差异,所以人们不得不转向其它的分类方法。昙呛蚐昙鞘墙昀捶展起来的新型分子标记。捎谥掷喽唷⒎植脊惴骸⒏叨榷嗵浴⒃雍闲愿摺⒅刈槁实汀按孟德尔共显性方式遗传等优点,非常适用于寄生虫虫种的鉴别和分类学的研究。标记是一种十分稳定的分子标记,方便、快捷、可靠,可以快速检测大量个体,结果稳定性好,重现性高,这两种标记为片形吸虫的分类提供了思路。对其进行研究。一、用昙墙醒芯浚禾崛∑挝鍰,利用网上搜寻的锒其进行扩增,电泳,根据电泳结果进行片形吸虫的遗传多样性分析和聚类分析;⒂标记进行研究:提取片形吸虫种引物对其进行扩增,从中寻找片形吸虫的特异片断,并回收克隆测序,根据测序结果重新设计引物进行转化,使其能有效区分彳芍值钠挝妗;竦玫膇:要结果如卜.:’緃乜://..產甤穒痵提供拜种物种
关键词:片形吸虫微卫星分类我们同时搜索了近源种日本血吸虫和曼氏血吸虫蛄校直鸬玫搅鹾跣列。通过设定筛选条件,共筛选了对铮渲衅挝鍿引物裕毡狙N对,曼氏血吸虫对。用这对锒个来自重庆、四川和广西的不同宿主的片形吸虫样本进行扩增,电泳,结果显示有对锬芄唤杏行扩增。对镒芄布觳獾搅龅任换颍慷許引物能检测到觯骄为个,反映了片形吸虫的遗传多态性较高。軸条带,构建矩阵,并用猵砑扑个片形吸虫样本之问的遗传相似系数。结果表明,片形吸虫种间差异为一,肝片吸虫种内差异为—,两株大片吸虫种内差异为得髌挝嬷旨洳钜齑笥谥帜诓钜欤帜诒湟煲脖冉厦菹嗨葡凳肗—软件对本研究的銎挝嫜窘芯劾啵个样本被聚为两类,第一类为大片吸虫,包括广西水牛源样本和重庆水牛源暂定种样本,第二类为肝片吸虫,包括重庆奶牛源、黄牛源、水牛源和黄羊源样本以及四川牦牛源样本。第二类又可以分为两个亚类,第一亚类为四川牦牛源样本,第二亚类包括除重庆水牛源暂定种样本外其他采自重庆不同宿主的片形吸虫样本。初步说明昙遣唤瞿芄磺执笃婧透纹妫还能够区分出片形吸虫的不同地理株。.种引物对来源重庆、四川以及广西的片形吸虫进行┰觯峁⑾忠物鸵能够扩增出特异片断,其中引物茉诟纹嬷欣┰┰龀鲆惶踉的特异片断,命名为甮;引物芄辉诟纹嬷欣┰龀鲆惶—奶匾炱莶庑蚪峁谄狭蕉税↖镌傺由—杓屏对引物,其中愿纹鍿铮猄.、甴.,源笃鍿铮命名为甮。以所采集的样本进行验证实验,结果表明,愿纹鍿锞茉肝片吸虫中产生一条特异条带,在大片吸虫中均没有扩增;源笃鍿锬茉诖笃又厍斓厍乃L迥诓杉健昶挝妫哂胁坏湫托翁宄た肀标记和标记鉴定,我们认为这是一株形态不典型的人片吸虫。西南人学硕士学位论文的猄序列及其引物,从中搜索片形吸虫的蛄校玫条,由于数量太少,所以显。断,命名为甴=庑┢匣厥湛寺〔,甴铣,甮片断长吸虫中产生一条特异条带,在肝片吸虫无扩增。表明鯯昙蔷;晒Γ悄苡行区分不同种的片形吸虫。,肩不明显,后端钝圆,睾丸·体/岩耘卸ㄆ渲直穑骋晌!爸屑淅纭薄>璖
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