基因的克隆与表达
基因克隆(gene cloning)
基因表达(gene expression)
-原核基因表达
-真核基因表达
基因克隆
Gene Cloning
概述
克隆载体
受体细胞
体外重组的策略
基因克隆工作流程
一、概述
确定了遗传信息的携带者,即基因的盆子载体是DNA而不是蛋白质
揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理
提出了中心法则和操纵子学说,破译了遗传密码
1973年Cohen完成第一个基因工程实验
经体外重组获得杂合DNA
杂合子转化入大肠杆菌
所需元件:
限制性内切酶
连接酶
载体
受体细胞
基因克隆(分子克隆molecular cloning)----通过体外重组技术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体,并导入受体细胞,扩增形成大量子代分子的过程。
基因克隆的核心-----体外重组(bination) : 人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。
基因克隆的技术路线
目的基因载体
体外重组
重组子(杂合DNA)
转化
受体细胞
筛选阳性克隆
大量扩增,获得子代DNA
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