ELISA试剂盒.ppt

ELISA试剂盒
影响试剂盒质量的因素
试剂盒的选用
试剂盒的质检方法
目前试剂盒存在的问题
影响试剂盒质量的因素
1．原材料
(1)固相材料 商品ELISA试剂盒中基本上都使用聚苯烯塑料微孔板，其对ELISA试剂盒的影响在于孔间的显色差异。
(2)抗原 --自然抗原、合成抗原和基因重组抗原。
纯 度：纯度不高可致试剂盒的特异性不强。
立体结构：合成抗原一般都是多肽抗原，缺乏完整抗原所具有的立体结构决定簇，用于相应的抗HCV和抗HIV抗体的检测有可能导致结合上述决定簇的抗体漏检。
影响试剂盒质量的因素
(5)色原底物：HRP最常用的色原底物有邻苯二胺(OPD)和四甲基联苯胺(TMB) 。
邻苯二胺(OPD)：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一，，最大吸收波长为492nm，显色加深，因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。OPD的缺点是其对机体具有致突变作用。
四甲基联苯胺(TMB)：氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数。试剂盒中常为已配好的A、B两种液态试剂，即一定浓度双氧水溶液和TMB。它们在溶液中相对不稳定，因此在使用ELISA试剂盒时，如底物A·或／和B出现颜色，或各取一滴混合后显色，说明该试剂盒的底物溶液已变质或已受污染，必须废弃。 ·
影响试剂盒质量的因素
2．试剂盒的方法学设计
双抗原夹心法测抗体(抗HIV、Tp)
洗板
待测
抗体
底物
温育
显色
酶标
抗原
E
E
洗板
Y
Y
Y
Y
Y
Y
固相
抗原
E
Y
Y
Y
E
E
E
Y
Y
Y
E
E
E
影响试剂盒质量的因素
间接法测抗体（抗HCV、Tp)
洗板
待测
抗体
底物
温育
显色
E
Y
酶标
抗体
E
Y
E
Y
洗板
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
固相
抗原
影响试剂盒质量的因素
双抗体夹心法测抗原-两步法
固相
抗体
温育
待测
抗原
底物
温育
显色
Y
Y
Y
E
Y
酶标
抗体
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
影响试剂盒质量的因素
双抗体夹心法测抗原-一步法
待测
抗原
底物
温育
显色
固相
抗体
Y
Y
Y
E
Y
酶标
抗体
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
洗板
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y
E
Y
Y
Y
Y
E
Y
E
Y
E
Y