第六章 真核基因在大肠杆菌中的表达.ppt

真核基因的大肠杆菌表达体系
大肠杆菌的表达载体
克隆的真核基因在大肠杆菌细胞中的表达
影响克隆基因在大肠杆菌中表达效率的因素
真核基因在大肠杆菌中的表达
大肠杆菌表达体系
克隆基因正确表达的基本条件
克隆基因表达活性的检测
真核基因的大肠杆菌表达体系
大肠杆菌表达体系
优越性:
1. 对大肠杆菌的背景知识,特别是基因表达调控的分子机理有深刻的了解;
2. 是一种安全的基因工程实验体系,拥有各类适用的寄主菌株和不同类型的载体;
3. 许多克隆的真核基因都可以在大肠杆菌细胞中实现有效、高水平的表达;
4. 大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉,易用于批量生产。
大肠杆菌中表达体系的不足:
1. 真核基因,在结构上同原核基因之间存在着很大的差别。
2. 真核基因的转录信号同原核的不同。
细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子;外源基因可能含有具大肠杆菌转录终止信号功能的核苷酸序列。
3. 真核基因mRNA的分子结构同细菌的有所差异,影响真核基因mRNA稳定性。
4. 许多真核基因的蛋白质产物,都要经过转译后的加工修饰(正确折叠和组装),而大多数的这类修饰作用在细菌细胞中并不存在;
5. 细菌的蛋白酶,能够识别外来的真核基因所表达的蛋白质分子,并把它们降解掉。
克隆基因正确表达的基本条件
最基本条件:应该能够进行正常的转录和转译,以及在正常情况下还与转译后加工及新生多肽在细胞中的分布有关。
重要条件:编码的蛋白质产物应能维持正常的稳定性。
具有核糖体结合位点;
具有克隆基因的功能(强)启动子;
插入序列的正确取向。
真核基因在大肠杆菌中的表达
克隆基因表达活性的检测
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