高效液相色谱的进样器和色谱.doc

高效液相色谱的进样器和色谱进样器早期使用隔膜和停流进们器, 装在色谱柱入口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求: 密封性好, 死体积小, 重复性好, 保证中心进样, 进样时对色谱系统的压力、流量影响小。 HPLCfj 样方式可分为:隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。 1. 隔膜进样。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内, 可把样品直接送到柱头填充床的中心, 死体积几乎等于零, 可以获得最佳的柱效, 且价格便宜, 操作方便。但不能在高压下使用(如 10MPA 以上); 此外隔膜容易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到 1~ 2%; 加之能碉各种溶剂的橡皮不易找到,常规分析使用受到限制。 2. 停流进样。可避免在高压下进样。但在 HPLC 中由于隔膜的污染, 停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”; 另一缺点是保留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。 3. 阀进样。一般 HPLC 分析常用六通进样阀( 以美国 RHEODYNE 公司的 7725 和 7725 I 型最常见), 其关键部件由圆形密封垫子( 转子) 和固定底座( 定子) 组成。由于阀接头和连接管死体积在存在, 柱效率低于隔膜进样( 约下降 5~ 10% 左右), 但耐高压(35 ~ 40MPA) , 进样量准确,重复性好(%) ,操作方便。( j- y"} }9 d/ }3 |/ s3 J( O-Z 六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。①用部分装液法进样时, 进样量应不大于定量环体积的 50%( 最多 75%) , 并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性决定于注器取样的熟练程度, 而且易产生由进样引起的峰展宽。②用完全装液法进样时, 进样量应不小于定量环体积的 5~ 10倍9 最少 3倍), 这样才能完全置换定量环内和流动相,消除管壁效应,确保进样的准确度及重复性。六通阀使用和维护注意事项:①样品溶液进样前必须用 滤膜过滤, 以减少微粒对进样阀的磨损。②转动阀芯时不能太慢, 更不能停留在中间位置, 否则流动相受阻, 使泵内压力剧增,甚至超过泵的最大压力; 转到进样位时,过高的压力将使柱头损坏。③为防止缓冲盐和样吕残留在进样阀中, 每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗, 或先用能溶解样品的溶剂冲洗,再用水冲洗。- G6 ~; Q5 |; B' [4E s3Q 4. 自动进样。用于大量样品的常规分析。: s3 f$ ~; s% S7 L!m 三、色谱柱 8F ?% g' A% ]6z 色谱是一种分离分析手段, 分离是核心, 因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于 HPLC 的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球( 包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为 3,5,7, 10UM 等,柱效理论值可达 5~ 16万/ 米。对于一般的分析只需 5000 塔板数的柱效; 对于同系物分析,只要 500 即可; 对于较难的分离物质对则可采用高达 2 万的柱子, 因此一般 10~ 30CM 左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。 7 ^2 O0 `/ C% U" h* d3 t$_ 柱效受柱内外因