2021年食品检验之PCR技术-食品安全检验技术.docx

食品检验之PCR技术:食品安全检验技术

　　摘要：多年来，微生物及其产生的各类毒素引发的食品污染层出不穷，微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中令人头痛的问题。伴随生物学技术和微电子技术的发展，食品微生物快速检验技术有了较大进展。PCR技术用于食品中致病微生物的检测较之传统方法含有快速、特异、敏感等特征,其优越性无可比拟,因此该技术在食品致病菌的检测方面含有很大的应用前景。
　　关键词：当代生物技术、微生物、PCR技术
　　当代生物技术是在分子生物学基础上建立的创立新的生物类型或新生物机能的实用技术，是当代生物科学和工程技术相结合的产物。当代生物技术以分子生物学、细胞生物学、微生物学、免疫学、遗传学、生理学、系统生物学等学科为支撑，结合了化学、化工、计算机、微电子等学科，从而形成了一门多学科相互渗透的综合性学科。就其应用领域，可分为农业生物技术、医学生物技术、植物生物技术、动物生物技术、食品生物技术、环境生物技术等。
　　伴随中国食品科学技术的发展和对外贸易的需要,食品的检测和分析工作已经提升到一个极其主要的地位。尤其是为了确保食品的标准品质,开展食品科学技术研究,寻求食品污染的根源,大家更需要对食品进行多种有效营养物质和对人体有害、有毒物质的检验和分析。自20世纪70年代起，多种分子生物学技术不停出现,关键包含核酸分子杂交技术、PCR技术和当代免疫技术等,现在这些技术在食品检测和分析等方面已经得到了很好的应用，尤其是PCR技术。
　　PCR技术是1985年诞生的一项DNA体外扩增技术。聚合酶链式反应简称PCR英文全称：PolymeraseChainReaction是体外酶促合成特异DNA片段的一个方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目标DNA得以快速扩增,含有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不但可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊疗或任何有DNA,RNA的地方
　　其基础原理是：在体外对特定的双链DNA片段靶DNA进行高效扩增，故又称基因体外扩增法。在体外适宜条件下,先将靶DNA变性成为单链,然后加入人工设计和合成的两段寡核苷酸引物,在热稳定的DNA聚合酶和4种dNTPs底物存在的条件下,这对引物沿靶DNA按5′→3′方向延伸,合成新的DNA双链。新合成的DNA双链又可作为扩增的模板,继续反复以上的DNA多聚酶链式反应。
　　单核细胞增生性李斯特氏菌:单核细胞增生性李斯特氏菌(LM)对牛奶等食品都有不一样程度的污染,是食品中的关键病原菌。传统的检测方法存在周期长、操作繁琐等不足之处。孙焕东等采取裂解法提取DNA,应用半套式PCR对其进行检测,设计合成的引物可特异地将其扩增,并对其它菌不产生反应,显示了较强的特异性。从敏感性看,检测程度可达成10个UFC以下,较之常规PCR检测有所提升;同时,检测只需要5～6h,较之传统方法快得多。杨百亮经过对TaqDNA聚合酶和引物浓度等条件的标化,建立简便实用的快速检测牛奶中单核细胞增多性李氏菌试剂盒,含有良好的应用前景。
　　肉毒梭菌:食品中肉毒梭菌是引发肉类中毒的潜在原因。用常规方法从食品中分离判定肉毒梭菌最少需要4天,不能达成快速检测的目标。王颖群等经过检索肉毒神经毒素的基因序列,选择保守区