实验五 食品中大肠菌群的测定.ppt

实验五食品中大肠菌群的测定
一、实验目的
1、学习食品中大肠菌群检测程序、方法;
2、掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。
二、实验材料
1、设备和材料
温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针
2、培养基及试剂
乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂(EMB)、远腾氏琼脂、革兰氏染色液
三、实验方法与步骤
1、采样及稀释
①以无菌操作将检样25g(或25ml)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用无菌均质器,以800r/min~1000r/min的速度处理1min,做成1:10的稀释液。
②用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇混匀,做成1:100的稀释液,换用1支1ml灭菌吸管,按上述操作依次作10倍递增稀释液
③根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计,选择三个稀释度,每个稀释度接种3管。也可直接用样品接种。
2. 乳糖初发酵试验
即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌。
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管;1ml及1ml以下者,用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管,置(36±1)0C温箱内,培养(24±2)h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产生者,则按下列程续进行

将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上,置(36±1)