培养基灭菌方式对细菌分离效率的影响.pdf

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培养基灭菌方式对细菌分离效率的影响阳，裴韬，杜娟，邓名荣，朱红惠刘愣∥⑸镅芯克D嫌τ梦⑸锕抑氐闶笛槭遥愣【直２赜胗τ弥氐闶笛槭遥愣ü阒／產摘要：自然界蕴含大量未／难培养微生物，分离这些微生物对理论研究和资源开发具有重要意义。本研究使用高压灭菌和过滤除菌方式制备培养基，采用稀释涂布方法，从红树林灰泥样品中分离获得晗妇ü基因序列分析对其进行鉴定，进而探究培养基灭菌方式对细菌分离效果的影响。结果表明：过滤除菌培养基生长的单菌落数目±鱿灾多于高压灭菌培养基生长的单菌落数目±觯涣街峙嘌掷胂妇娜郝浣峁乖诿拧⒖坪褪舴掷嗨缴献芴逑嗨疲优势类群的数目和少数类群存在差异；过滤除菌培养基分离细菌的疭指数、均匀度、新种率、基因多样性均高于高压灭菌培养基，而其与近缘模式菌株相似度的平均值和中位数则低于高压灭菌培养基。因此，过滤除菌培养基分离获得细菌的多样性、均匀性和新颖性均高于高压灭菌培养基。本研究首次探究培养基灭菌方式对细菌分离效果的影响，具有更高分离效率的过滤除菌培养基为未／难培养微生物菌株资源获取提供了借鉴。关键词：过滤除菌；高压灭菌；文献标识码：，’生物资源，～基因；分离效率中图分类号：文章编号：———，珼疓，，珻甀琣．簍，，甌琫琾簑甌，琫甌，收稿日期：——修回日期：——接受日期：—作者简介：刘阳，男，博士，助理研究员，主要从事微生物资源获取和开发利用。猰簂甤ㄑ读O等耍褐旌旎一┦浚芯吭保饕4邮挛⑸镒试捶⒕颉⒈；ず凸蚕砝谩—：．基金项目：广东省重点领域研发计划；广东省省级科技计划项目珿：—．—
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言自然界蕴含大量微生物。截至年拢勒国际原核生物命名法发表的微生物共有：／／．．／／。与这些可培养微生物相比，有数百万种⋯至十亿种心⑸锶晕被培养，这些尚未获得纯培养物的微生物被称作未／难培养微生物Ｎ矗雅嘌⑸锸恐诙啵嘈多样，是地球生物圈的重要组成部分，参与碳、氮、硫等多种元素的生物地球化学循环和能量流动¨凰具有高度异化的新陈代谢途径，能够产生结构复杂的代谢产物【浚侵匾5纳镒试础Ｓ捎诖罅课⑸未／难培养，在很大程度上限制了微生物资源的开发和利用。为了更加全面地认识微生物多样性和挖掘其潜在新功能，未／难培养微生物的分离重新得到了重视㈧。为了提高未／难培养微生物的分离效率，目前已经建立了多种培养方法，如极限稀释培养法【、微流控芯片技术协’、模拟自然环境扩散盒技术阳⑾赴⒛包埋技术【蘸团嘌檠Ъ际酢取Ｏ喽杂诖车南释涂布分离方法，这些新方法的使用显著提高了微生物的培养效率，获得了大量微生物新分类单元。微生物的生长繁殖需要多种营养成分，因此，培养基的组分对微生物可培养性有显著的影响。近些年，研究人员通过调整培养基组分绻延Q、更换凝固剂¨！⑻砑庸趸饷浮А啊⒉煌缱庸┨搴褪芴濉⑿号分子驮谎方骸和培养条件映づ养时间¨和模拟原位培养¨们等刺岣呶⑸锟膳嘌性。在微生物分离过程中，为了避免杂菌干扰，改良培养基通常要进行灭菌处理。但是，迄今为止，培养基灭菌方式对微生物可培养性的影响却鲜有报道。本研究使用红树林灰泥样品，培养基分别采用高压灭菌和过滤除菌，利用稀释涂布方法分离微生物，并对分离菌株进行基因序列测序，确定其分类信息，最后通过单菌落数目、物种组成、物种和基因多样性以及相似度水平等方面分析，探索培养基灭菌方式对细菌分离效果的影响。牧嫌胧约样品采集年月，在惠州大亚湾近岸采集底泥盢，盓