dnaran琼脂糖凝胶电泳PPT课件.pptx

核酸
DNA
RNA
Genomic DNA ( 原核、真核、病毒 )
细胞器DNA ( 叶绿体、线粒体等)
质粒DNA ( 细菌、放线菌等 )
mRNA ( 1%-5% )
rRNA (80%-85%)
tRNA(小分子RNA) (15%-20%)
核 酸(nucleic acid)
核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作 。
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核酸的理化性质
理化性质
DNA化学性质稳定，物理上易碎，粘度大
RNA化学性质比DNA活泼，易受RNA酶的污染
溶解性
均溶于水
不溶于一般有机溶剂,在70%乙醇中形成沉淀
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核酸分离、纯化原则
1、保持核酸分子一级结构的完整性
温度不要太高
控制pH值范围(pH值5-9)
保持一定离子强度
减少物理因素对核酸的机械剪切力
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核酸分离、纯化原则
核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构。
所用器械和一些试剂需高温灭菌
提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂
2、防止核酸的生物降解
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DNA酶抑制剂
金属离子螯合剂：
DNA酶需要金属二价离子Mg2+、Ca2+的激活，常用EDTA(乙二胺四乙酸)离子螯合剂，可抑制DNA酶活性。
阴离于型表面活性剂
SDS除对核酸酶有抑制作用外，还能使蛋白质变性，并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物，该复合物有核酸酶抑制剂作用。
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RNA酶（RNAase)抑制剂
DEPC(二乙基焦碳酸盐) 粘性液体，很强的核酸酶抑制剂。与蛋白质中His 结 合使蛋白变性。
使用注意：
。
，保存在4 ℃或液氮中；
。
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1：手指头
2：枪头
3：水/缓冲液
4：实验台面
5：内源 Rnase
6：RNA 样品
7：质粒抽提
8：RNA 保存
9：阳离子 (Ca, Mg)
10：后续实验所用的酶
Rnase 污染的10大来源
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DNA提取的基本步骤


、纯化


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材料准备
使用新鲜材料，样品材料不要反复冻融
提取血液基因组DNA时，要选择有核细胞（白细胞）
含病毒的液体材料DNA含量较少，提取前先富集
基因组DNA的提取
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细胞裂解
裂解液
经典的裂解液几乎都含有去污剂和盐，可以抑制样品中的核酸酶
含蛋白酶的裂解方法：基因组DNA
高浓度蛋白变性剂的裂解方法：RNA
含CTAB的裂解法：富含多糖的样品的基因组 DNA
含SDS碱裂解法：质粒DNA
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