抗原抗体反应的类型PPT课件.pptx

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第三章免疫原和抗血清的制备
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抗原和抗体是免疫学检测的两个重要因素；也是整个免疫反应的基本条件。　　　　　第一节 免疫原的制备 　免疫原是诱导机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
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颗粒性抗原包括人和各种动物细胞抗原以及各种细菌抗原和寄生虫体抗原。血细胞抗原制备比较简单，常用的细胞抗原为绵羊红细胞，采用该细胞制备溶血素，直接取新鲜绵羊红细胞，以无菌生理盐水洗涤3次（每次离心2000r／min 10min），最后配成106／ml浓度的细胞悬液，即可应用。细菌抗原多用液体或固体纯培养物，经集菌后处理。
一、颗粒性抗原的制备
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细菌的鞭毛抗原需用有动力的菌株，％－％甲醛处理，而菌体抗原则需要100℃加温2－。毒素抗原则需要在杀菌后再加 ％－l％氯化钙溶液。寄生虫和真菌抗原除用破碎法加工粗提外，大多要加以适当纯化。有些细胞膜亦可制成颗粒性抗原。颗粒抗原悬液呈浑浊状或乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少加佐剂作皮内注射。
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（一）组织和细胞粗抗原的制备 　 　所用组织必须是新鲜的或低温保存的。器官或组织材料取得后应立即去除表面的包膜或结缔组织以及一些大血管。脏器应用生理盐水灌注，去除血管内残留的血液及有形成分，／LNaN3生理盐水洗去血迹及污染物。将洗净的组织剪成小块，然后进行粉碎。粉碎的方法有两类：①高速组织捣碎机法②研磨法
二、可溶性抗原的制备和纯化
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2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备　　制备抗原的细胞包括正常细胞、传代细胞或病理细胞（如肿瘤细胞）。细胞抗原一般分为三个组分：膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）和细胞核与核膜抗原。三种抗原的制备均需将细胞破碎，其方法有以下几种。
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（1）反复冻融法：将细胞或整块组织置－20℃冰箱内冻结，然后置室温融化，如此反复2次，大部分组织细胞及细胞内的颗粒可冻融破碎。 （2）超声破碎法：常用于处理微生物和组织细胞。 （3）自溶法：利用组织和微生物的自身酶系统，在一定的pH和温度下，使其细胞裂解。自溶的温度，对动物组织细胞常选0－4℃，而对待微生物常选室温（22－25℃）。自溶时常需加入少量防腐剂，如甲苯或氯仿等，因NaN3抑制酶的活力，则不宜使用。
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（4）酶处理法：　　溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等，在一定的条件下能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶在碱性条件下，，该法适用于多种微生物。酶破坏细胞具有作用条件温和、内含物成分不易受到破坏、细胞壁损坏的程度可以控制等特点。
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（5）表面活性剂处理法：　　在适当的温度、pH及低离子强度的条件下，表面活性剂能与脂蛋白形成微泡，使膜溶解或渗透性改变。常用的表面活性剂有十二烷基硫酸钠（SDS阴离子型）、二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚山梨酯（非阳离子型）、苯扎溴胺等。该方法常用于破碎细菌，且作用比较温和。在提取核酸时常用此方法破碎细胞。
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