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最新生物选修三知识点总结.doc生物苏教版 选修三 学案郭高宾整理
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第一章基因工程
第一节基因工程概述
.基因工程的概念
操作
环境
操作
对象
操作
水平
基本过程
结果
生物
基因
分子
剪切T拼接T导入T表
体外
水平
达
人类需要的基因产物
由于基因工程是在 DNA分子水平上进行操作,因此又叫做重组DNA技术。

（一） “分子手术刀”一一限制性核酸内切酶（简称限制酶）
1. 来源：主要是从 原核生物中分离纯化出来的。
2. 功能：能够识别双链 DNA分子的某种 特定的核苷酸序列，并且使每一条链中 特定部位的两
个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开。
3. 结果：经限制酶切割产生的 DNA片段末端通常有两种形式： 黏性末端 和平末端。
（二） “分子针线” 一一DNA连接酶
：根据酶的来源不同，可分为 E • coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类
2•功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键。
★两种DNA连接酶（E • coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：
① 相同点：都缝合磷酸二酯键
② 区别：E. coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使 黏性末端之间连接；
T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较 低。
★ DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较
卜暑曙DNA连接酶
DNA聚合酶
不
同点
1下
七b 2连接的 =7^ He
DNA
］阿双链
单链
$
模板
不要模板
要模板
连接的
对象
2个DNA片段
单个脱氧核苷酸加到已存在的单 链DNA片段上
相
作用实
形成磷酸二酯键
同点
质 j
血化学本 质
蛋白质
（三）“分子运输车”一一载体
1. 载体具备的条件：
① 能在受体细胞中 复制并稳定保存；
② 具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入；
③ 具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
2. 基因工程常用的载体有： 质粒、噬菌体 和动、植物病毒 等。
最早应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链 环状DNA分子。

（一）获得目的基因（目的基因的获取）
1. 获取方法主要有两种：①从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。
② 用人工的方法合成。
★获得原核细胞的目的基因可采取 直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是 人工合成。
★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。
2. 利用PCR技术扩增目的基因
（1） PCR勺含义：是一项在生物体外复制特定 DNA片段的核酸合成技术。
（2） 目的：获取大量的目的基因
（3）原理:
DNA双链复制
(4)
过程:
第一步：
加热至
90 -
〜95C DNA解链为单链；
第二步:
:冷却到
55 -
〜60C,
引物与两条单链DNA结合；
第三步:
:加热至
70 -
〜75C,
热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成
（5）特点：指数形式扩增
（二） 制备重组DNA分子（基因表达载体的构建）
1. 重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有 标记基因。
★标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有 目的基因，从而将含有目的基因的细胞 筛选出来。
2. 方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用 DNA连接酶把两者连接。
（三） 转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞）
1. 转化的概念：是 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内 维持稳定和表达的过程。
2. 常用的转化方法：
① 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌介导转化技术（农杆菌转化法），其次还有基因枪
介导转化技术（基因枪法）和花粉管通道技术（花粉管通道法）。
② 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射 技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。
③ 将目的基因导入微生物细胞： Ca+处理法。
（四） 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达（目的基因的检测与鉴定）
1. 首先要检测转基因生物的染色体 DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交 技术。
2. 其次还要检测目的基因是否 转录出mRNA，方法是采用 DN