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液相色谱- 质谱联用(lc/ms) 的原理及应用液相色谱—质谱联用的原理及应用简介色谱质谱的在线联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来, 实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。而且也简化了样品的前处理过程,使样品分析更简便。色谱质谱联用包括气相色谱质谱联用(GC-MS) 和液相色谱质谱联用(LC-MS) ,液质联用与气质联用互为补充,分析不同性质的化合物。液质联用与气质联用的区别: 气质联用仪(GC-MS) 是最早商品化的联用仪器,适宜分析小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物; 用电子轰击方式( EI) 得到的谱图可与标准谱库对比。液质联用(LC-MS) 主要可解决如下几方面的问题:不挥发性化合物分析测定; 极性化合物的分析测定; 热不稳定化合物的分析测定; 大分子量化合物( 包括蛋白、多肽、多聚物等) 的分析测定; 没有商品化的谱库可对比查询,只能自己建库或自己解析谱图。现代有机和生物质谱进展在 20 世纪 80及 90 年代,质谱法经历了两次飞跃。在此之前,质谱法通常只能测定分子量 500D a 以下的小分子化合物。20世纪70 年代, 出现了场解吸( FD) 离子化技术, 能够测定分子量高达 1500~2000D a 的非挥发性化合物, 但重复性差。 20 世纪 80 年代初发明了快原子质谱法( FAB-MS ),能够分析分子量达数千的多肽。随着生命科学的发展,欲分析的样品更加复杂,分子量范围也更大, 因此, 电喷雾离子化质谱法( ESI-MS ) 和基质辅助激光解吸离子化质谱法( MALDI-MS )应运而生。目前的有机质谱和生物质谱仪, 除了 GC-MS 的 EI和 CI源, 离子化方式有大气压电离( API )(包括大气压电喷雾电离 ESI 、大气压化学电离 APCI 、大气压光电离 APPI )与基质辅助激光解吸电离。前者常采用四极杆或离子阱质量分析器,统称 API-MS 。后者常用飞行时间作为质量分析器, 所构成的仪器称为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪( MALDI-TOF-MS )。 API-MS 的特点是可以和液相色谱、毛细管电泳等分离手段联用, 扩展了应用范围, 包括药物代谢、临床和法医学、环境分析、食品检验、组合化学、有机化学的应用等; MALDI-TOF-MS 的特点是对盐和添加物的耐受能力高, 且测样速度快, 操作简单。质谱原理简介: 质谱分析是先将物质离子化, 按离子的质荷比分离, 然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标, 离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。常见术语: 质荷比: 离子质量( 以相对原子量单位计) 与它所带电荷( 以电子电量为单位计) 的比值, 写作 m/Z. 峰: 质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰. 离子丰度: 检测器检测到的离子信号强度. 基峰: 在质谱图中,指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰. 总离子流图;质量色谱图;准分子离子;碎片离子;多电荷离子;同位素离子总离子流图: 在选定的质量范围内, 所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图, 也称 TIC 图. 质量色谱图指定某一质量( 或质荷比) 的离子其强度对时间所作的图. 利用质量色谱图来确定特征离子, 在复杂混合物分析及痕量分析时是 LC/MS 测定中最有用的方式。当样品浓度很低时 LC/MS 的 TIC 上往往看不到峰, 此时, 根据得到的分子量信息, 输入 M+1 或 M+23 等数值, 观察提取离子的质量色谱图, 检验直接进样得到的信息是否在 LC/M S 上都能反映出来,确定 LC 条件是否合适,以后进行 MRM 等其他扫描方式的测定时可作为参考。 指与分子存在简单关系的离子,通过它可以确定分子量. 液质中最常见的准分子离子峰是[M+H]+ 或[M-H]- . 在 ESI 中, 往往生成质量大于分子量的离子如 M+1,M+23,M+39,M+18...... 称准分子离子, 表示为:[M+H]+,[M+Na]+ 等碎片离子: 准分子离子经过一级或多级裂解生成的产物离子. 碎片峰的数目及其丰度则与分子结构有关, 数目多表示该分子较容易断裂, 丰度高的碎片峰表示该离子较稳定, 也表示分子比较容易断裂生成该离子。 Ephedrine, MW= 165 多电荷离子: 指带有 2 个或更多电荷的离子, , 单电荷离子是绝大多数, 只有那些不容易碎裂的基团或分子结构- 如共轭体系结构- 才会形成多电荷离子. 它的存在说明样品是较稳定的. 采用电喷雾的离子化技术, 可产生带很多电荷的离子, 最后经计算机自动换算成单质/ 荷比离子。同位素离子由元素的重同位素构成的离子称为同位素离子. 各