肝脏巨噬细胞(KCs)的分离 与培养 研究生：魏思东 戴卓娅 导师： 龚建平 2010-05-04
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肝脏细胞悬液制备
门静脉穿刺，以10ml／min流量经门静脉灌注PBS ，直至肝脏呈黄白色，总量约20ml。再用20ml ％的Ⅳ型胶原酶溶液(sigma ，PBS液稀释)门静脉灌注(小鼠不用此步骤）。
取下肝脏加入20ml ％胶原酶，37 oC孵育40 min，经200目细胞筛过滤。
PBS稀释至50ml, 300×g 5 min，4oC，离心洗涤2次，取沉淀PBS稀释至50ml，用50g×g 3min, 4oC离心，弃沉淀，将上清液以300×g，5min, 4oC离心，取沉淀。
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用镊子划碎肝组织
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装入试管消化
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肝脏消化吹打后细胞悬液
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细胞悬液过滤
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洗涤与肝细胞沉淀
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梯度离心
Percoll原液9份加入1份PBS（10倍浓度）配成100%的SIP。
取4支无菌离心管，沿着管壁加入2 mL 50％的SIP，然后倾斜（60o）试管，轻轻的沿着管加2mL25％的SIP细胞悬液（小鼠2管，大鼠4管）。
500×g，离心15 min，4oC， 50％的SIP和25％的SIP层面之间有一层白色物，吸管轻轻的吸取之，置离心管中，用PBS离心清洗2遍，弃上清(300×g，5min)。
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非肝细胞SIP离心准备
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SIP离心后细胞层与洗涤
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