漆酶在纳米多孔金上的固定化及其酶学性质研究.pdf

2008 年第 66 卷化学学报 Vol. 66, 2008 第 18 期, 2075 ~2080 ACTA CHIMICA SINICA No. 18, 2075 ~ 2080 * E-mail: ******@sdu. Received April 1, 2008; revised May 8, 2008; accepted May 26, 2008. 国家重点基础研究发展计划(No. 2007CB93) 和国家自然科学基金(No. 30570014) 资助项目. ·研究论文· 漆酶在纳米多孔金上的固定化及其酶学性质研究邱华军 a 徐彩霞 a 姬广磊 a 黄锡荣* , a , b 韩书华 a 丁轶 a 曲音波 b ( a 山东大学胶体与界面化学教育部重点实验室济南 250100) ( b 山东大学微生物技术国家重点实验室济南 250100) 摘要利用纳米材料为载体对酶等生物大分子进行固定化近年来引起人们的浓厚兴趣. 以 Au/Ag 合金为原料, 通过控制浓硝酸的腐蚀时间再辅以退火处理得到了不同孔径的纳米多孔金(NPG), 利用扫描电镜(SEM) 和 N 2 气体吸附仪对孔性质进行了表征. 以 NPG 为载体, 用α- 硫辛酸和 N - 乙基- N' -(3- 二甲基氨基丙基) 碳酰二亚胺/ N - 羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS) 对金表面进行活化, 通过化学共价偶联的方法对产自 Trametes versicolor 的漆酶进行了固定化. 比较了孔径大小对酶固定化量及比活力的影响. 发现小孔径更有利于对该漆酶的固定化. 与游离酶相比, 固定化酶的最适 pH 没有改变, 但最适温度却从原来的 40 ℃升到了 60 ℃. 固定化后, 漆酶的 pH 和热稳定性都明显提高了. 重复使用 8 次仍能保持初始活力的 65%, 且在 4 ℃下保存 1 个月几乎观察不到酶活力的下降. 此外, 失活的固定化酶经浓硝酸处理后, NPG 载体可重复利用. 本结果初步显示出了 NPG 在生物技术领域中的应用潜力. 关键词漆酶; 固定化; 纳米多孔金; 酶学性质 Immobilization of ase on Nanoporous Gold and Its Enzymatic Properties QIU, Hua-Jun a XU, Cai-Xia a JI, Guang-Lei a HUANG, Xi-Rong * , a , b HAN, Shu-Hua a DING, Yi a QU, Yin-Bo b ( a Key Laboratory of Colloid and Interface Chemistry of the Ministry of Education of China , Shandong University , Jinan 250100 ) ( b State Key Laboratory of Microbial Technology of China , Shandong University , Jinan 250100 ) Abstract Immobilization of biomol