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细胞培养操作规范
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一：细胞培养的基本条件：
：
细胞培养间消毒
a：使用前紫外照射20-30分钟
b：使用完75%酒精擦拭台面，紫外照射15分钟。
c：每两周用84消毒液擦拭地面、台面一次的方式进行消毒
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超净工作台：
使用前
开启柜内紫外灯照射15－30分钟
使用时
开启鼓风，在台面内操作
使用完毕后
要用75%酒精将台面和台内四周擦拭干净，紫外照射10分钟。
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CO2 培养箱：
37℃ ， 5 ％CO2 。
CO2 培养箱应注意的问题：
▫ 用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。
▫ 保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。
▫ 箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000毫升，以保持箱内湿度。
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控制水盘内污染的方法： 
1、 定期(至少每两周一次)，更换水盘内的无菌蒸馏水或无菌去离子水。
2、 在水盘内添加适量硫酸铜，预防真菌污染。配制方法：20g无水硫酸铜＋5ml浓硫酸＋1L灭菌纯水。
3、 水盘内添加适量抗生素。 
4、定期为培养箱（含水盘）进行一次高温灭菌。
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2. 细胞培养条件
细胞培养器皿：
细胞培养瓶：
▫ 25平方厘米（加液量3-5ml）
▫ 75平方厘米（加液量10-15ml）
▫ 150平方厘米（加液量40ml）
细胞培养板：
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细胞培养皿
▫ 35mm （加液量3ml)
▫ 60mm （加液量5ml)
▫ 100mm（加液量10ml)
150mm (加液量15ml)
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常用培养基：
RPMI1640：
适合许多种细胞，如肿瘤细胞、正常细胞的原代培养、传代培养等。
尤其适合人白细胞，如H9、HL-60、IM-9和K-562等细胞系的培养。
DMEM：
DMEM（A）【不含谷氨酰胺、可高压灭菌】
DMEM（H）【含谷氨酰胺、高糖型（4500mg/L）、除菌过滤灭菌】
DMEM（L）【含谷氨酰胺、低糖型(1000mg/L)、除菌过滤灭菌】
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血清：
常用血清种类：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清
血清的灭活（消除补体活性） 56℃ ，30 分钟。
使用浓度：5%-20%，一般10%
血清的消毒：过滤除菌
血清解冻步骤：–20℃ 或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般用15ml无菌离心管分装。
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谷氨酰胺：
谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃保存，临用前加入培养液。
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