(三)网织红细胞计数.ppt

实验三　网织红细胞计数
一、实验原理
网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构，可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比，或×红细胞计数结果报告其绝对值。
1
精选可编辑ppt
网织红细胞（Ret）
是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
　分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型）
2
精选可编辑ppt
网织红细胞
3
精选可编辑ppt
计数方法
1、普通光学显微镜法：活体染色后推片镜检
2、网织细胞计数仪法：荧光染色后用流式细胞术计数
4
精选可编辑ppt
二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液
2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm（较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
5
精选可编辑ppt
三、操作步骤
1. 染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合（玻片法）；试管法取染液2滴入试管，加血2滴混匀，封闭好，待15分钟以上时间，
2. 推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜，
3. 低倍镜浏览，选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜，在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视野RBC总数>1000为止）。
6
精选可编辑ppt
Miller窥盘
A
3
1
B
将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。
7
精选可编辑ppt
8
精选可编辑ppt
四、计算
：网织红细胞（Retic）百分率(%)= （大方格内Retic总数）/（小方格内RBC总数×9）×100%
：网织红细胞（Retic）百分率(%)= 多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数×100%
9
精选可编辑ppt
五、注意事项
，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动，使染料和血液混合，防止凝固。
，混合后不能立即推片，室温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻片防止蒸发。
：1为宜，贫血适当加血量。
，弓形移动，多个区域计数
，以免变质沉淀。

10
精选可编辑ppt